"KHYG-1:人NK細胞淋巴瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：懸浮

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關(guān)重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

SKM-1細胞類似產(chǎn)品：：HGMC細胞、GM00637H細胞、L cells細胞

Hs940T細胞類似產(chǎn)品：：A549/ATCC細胞、OCI AML5細胞、SGC-996細胞

LNCaP FGC細胞類似產(chǎn)品：：H446細胞、SMC-1細胞、H1092細胞

H510細胞類似產(chǎn)品：：OCI-LY-1細胞、BEL7404細胞、IMR-90細胞

[細胞產(chǎn)品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：NK細胞淋巴瘤/白血??；女性

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細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣

alpha-TC1-6細胞類似產(chǎn)品：：SW-527細胞、CTV-1細胞、SLK細胞

HAVSMC細胞類似產(chǎn)品：：HCC95細胞、P3/NS1/1-Ag4-1細胞、Colon-38細胞

PTK 2細胞類似產(chǎn)品：：COLO 699細胞、NS1-Ag4/1細胞、hCMEC/D3細胞

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應(yīng)立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升GAO到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：懸浮

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導致細胞生長不均勻。研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C 太久。一些懸浮細胞抱團生長是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很GAO的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制HAO細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)（該方法只能去除部分較大的細胞團）。部分細胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等），這個是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài)；如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細胞代次較GAO，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。

P3HRI細胞類似產(chǎn)品：：SCL I細胞、CCF-STTG1細胞、MDST8細胞

SKBr3細胞類似產(chǎn)品：：Hs-281-T細胞、HFTF細胞、OAW 42細胞

SO-RB50細胞類似產(chǎn)品：：U118-MG細胞、NP69SV40T細胞、H-660細胞

UMUC-3細胞類似產(chǎn)品：：P388D1細胞、Psi-2 DAP細胞、MOLT 16細胞

GOS3細胞類似產(chǎn)品：：NCIH660細胞、H-28細胞、LAN-1細胞

MCF 10A細胞類似產(chǎn)品：：OCI-Ly01細胞、HBdSMC細胞、University of Michigan-Renal Carcinoma-2細胞

Hs 888.T細胞類似產(chǎn)品：：SPDC-CCL141細胞、LC-MS細胞、TCC-PAN2細胞

H-1944細胞類似產(chǎn)品：：SNB.19細胞、H-35細胞、Rat 2細胞

H-250細胞類似產(chǎn)品：：H520細胞、Functional Liver Cell-7細胞、OUMS-27細胞

Hu-P-T3細胞類似產(chǎn)品：：OCM1細胞、NCI-H28細胞、526mel細胞

RCSMC細胞類似產(chǎn)品：：OVCAR.8細胞、H-2073細胞、LAN-5細胞

RPMI No. 1846細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2081細胞、MDA-MB-231 #4175細胞、SK-OV-3細胞

MC-4細胞類似產(chǎn)品：：SUIT2細胞、PTK-2細胞、CAL-85-1細胞

SKCO 1細胞類似產(chǎn)品：：TE32細胞、JJN3細胞、MDA-MB 231細胞

Ketr3細胞類似產(chǎn)品：：HRA19細胞、VE細胞、RPMI7666細胞

Walker256細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1993細胞、kms 11細胞、624mel細胞

PG-4細胞類似產(chǎn)品：：SuDHL 5細胞、786-O細胞、Karpas299細胞

MD Anderson-Metastatic Breast-415細胞類似產(chǎn)品：：GM17219細胞、UACC-812細胞、D-324 Med細胞

MOLM-16細胞類似產(chǎn)品：：McA-RH8994細胞、Hs 766T細胞、L-428細胞

KY70細胞類似產(chǎn)品：：MC3T3-E1 Subclone 4細胞、SNU398細胞、Malme-3M細胞

IPEC-J2細胞類似產(chǎn)品：：NT2細胞、Det. 562細胞、ACC-M細胞

G361mel細胞類似產(chǎn)品：：VP 267細胞、HCC-202細胞、HPB/ALL細胞

HuCCT-1細胞類似產(chǎn)品：：T-98細胞、AR-42J細胞、RPMI1788細胞

MPP 89細胞類似產(chǎn)品：：KY180細胞、Sp 2/0-Ag 14細胞、INS1細胞

KHYG-1:人NK細胞淋巴瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

PLCPRF5細胞類似產(chǎn)品：：SCL-II細胞、QBC939細胞、L929(NCTC)細胞

SKGT2細胞類似產(chǎn)品：：Hs 895 T細胞、SK LU 1細胞、TE 32細胞

SL-29細胞類似產(chǎn)品：：MB39細胞、LED-WiDr細胞、E0771細胞

H-1563細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2023細胞、MIN6細胞、NCIH1568細胞

MPC 11細胞類似產(chǎn)品：：KLE細胞、H1105細胞、SEG-1細胞

ACC-2細胞類似產(chǎn)品：：NCIH226細胞、U373 MG細胞、Pt K1 (NBL-3)細胞

SP2-0-Ag14細胞類似產(chǎn)品：：KNS-81細胞、Toledo細胞、MHH-CALL2細胞

RK13細胞類似產(chǎn)品：：CCLP1細胞、AMJ2C8細胞、H-2444細胞

HuH7細胞類似產(chǎn)品：：CAL-120細胞、MeT 5A細胞、M 1細胞

PL 45細胞類似產(chǎn)品：：RK 13細胞、HC-11細胞、Human Embryo Lung-1細胞

HN-6細胞類似產(chǎn)品：：ANA-1細胞、MDA-MB 453細胞、OSA細胞

NCIH64細胞類似產(chǎn)品：：Colo-201細胞、HL-1細胞、HOP62細胞

SNGM細胞類似產(chǎn)品：：H2009細胞、RT4-D6-P2T細胞、293-FT細胞

MDA-MB-453細胞類似產(chǎn)品：：H-2444細胞、C57 Mouse Tumor 64細胞、HS-729細胞

C57 Mouse Tumor 64細胞類似產(chǎn)品：：BALB/3T3細胞、MDAPCa2b細胞、RT-4細胞

H-810細胞類似產(chǎn)品：：SKRC-42細胞、COLO-320DM細胞、H 9細胞

B16 subline B78細胞類似產(chǎn)品：：SKMEL-2細胞、DMS-273細胞、CALU1細胞

A10細胞類似產(chǎn)品：：SK-MEL2細胞、alphaTC clone 6細胞、OV90細胞

MV4-11細胞類似產(chǎn)品：：EBTr (NBL-4)細胞、AC16 [Human hybrid]細胞、SKLU01細胞

CWR22R細胞類似產(chǎn)品：：EAhy926細胞、A72細胞、SK_N_BE2C細胞

NBLS細胞類似產(chǎn)品：：CEF細胞、RT-BM 1細胞、RK 13細胞

T24(ECV304)細胞類似產(chǎn)品：：Porcine Kidney-15細胞、Panc 3.27細胞、DI TNC-1細胞

MOLP8細胞類似產(chǎn)品：：D341MD細胞、LX-2細胞、McCoy B細胞

UM2細胞類似產(chǎn)品：：Pt K1 (NBL-3)細胞、MDA-MB-435S細胞、Molm 14細胞

SBC-5細胞類似產(chǎn)品：：SACC-LM細胞、Soleus clone 8細胞、253J-Bladder-V細胞

M109細胞類似產(chǎn)品：：JAR細胞、RGC5細胞、Hs895.T細胞

SCC 9細胞類似產(chǎn)品：：MLE-12細胞、SK-MEL-24細胞、GM03671C細胞

H-2141細胞類似產(chǎn)品：：67NR細胞、TK10細胞、bEND.3細胞

C32 [Human melanoma]細胞類似產(chǎn)品：：T/GHA-VSMC細胞、WC00097細胞、SCC-15細胞

NCIH250細胞類似產(chǎn)品：：NCIH322細胞、8305-C細胞、SNU-761細胞

DI TNC-1細胞類似產(chǎn)品：：MXI細胞、KP-4細胞、SW948細胞

Hx147細胞類似產(chǎn)品：：343 MG細胞、BJAB細胞、COLO 394細胞

Michigan Cancer Foundation-12F細胞類似產(chǎn)品：：HBL 100細胞、HRCEC細胞、WM-2664細胞

LSECs細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H295細胞、QGY7701細胞、DHL10細胞

ABE-8.1/2細胞類似產(chǎn)品：：Bovine ENDometrial cells細胞、RC-K8細胞、FL 62891細胞

ZR75-1細胞類似產(chǎn)品：：MSB-1細胞、MMAc-SF細胞、H1373細胞

L929細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1792細胞、HuT 78細胞、MDCKII-WT細胞

SO-RB50細胞類似產(chǎn)品：：U118-MG細胞、Nthy-ori 3-1細胞、32D.3細胞

SuDHL 2細胞類似產(chǎn)品：：DH 82細胞、Ly7細胞、H378細胞

Neuro2a細胞類似產(chǎn)品：：DKMG細胞、IPAM-WT細胞、H-1651細胞

LUDLU-1細胞類似產(chǎn)品：：HOP62細胞、SY5Y細胞、NCIH1734細胞

CEMC1細胞類似產(chǎn)品：：DK-MG細胞、H9c2 (2-1)細胞、MDCK.2細胞

MMAc-Serum Free細胞類似產(chǎn)品：：OCI-Ly18細胞、TE-4細胞、KTCTL140細胞

SUDHL5細胞類似產(chǎn)品：：T98-G細胞、NEC-8細胞、KP 4細胞

D-324MED細胞類似產(chǎn)品：：SF 539細胞、A-875細胞、OE-33細胞

SKMES1細胞類似產(chǎn)品：：MG63細胞、NU-GC-4細胞、SW-982細胞

HEK-293細胞類似產(chǎn)品：：Ramos 2G6.4C10細胞、OCI-Ly19細胞、NPA'87細胞

Murine Carcinoma-38細胞類似產(chǎn)品：：SNU-739細胞、95-D細胞、87MG細胞

Dx5細胞類似產(chǎn)品：：NCI-UMC-11細胞、Saos2細胞、GT39細胞

Hs 819.T細胞類似產(chǎn)品：：MPVECs細胞、NU-GC-3細胞、M3 Clone M-3細胞

3-LL細胞類似產(chǎn)品：：CCD 966 SK細胞、SRS-82細胞、SW-954細胞

KMBC細胞類似產(chǎn)品：：MKN-28細胞、TE 85 ClF-5細胞、Neukoplast細胞

NCIH28細胞類似產(chǎn)品：：SJRH 30細胞、Tu 177細胞、3 LL細胞

JOSK-M細胞類似產(chǎn)品：：SKNO-1細胞、Colo699細胞、HcaF細胞

OVCAR433細胞類似產(chǎn)品：：BEL/FU細胞、HBZY-1細胞、Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2細胞

SK-MEL-31細胞類似產(chǎn)品：：CHO cell clone K1細胞、Centre Antoine Lacassagne-39細胞、PC 61.5.3細胞

MGHU1細胞類似產(chǎn)品：：WM2664細胞、MDA-MB-415細胞、RC-K8細胞

H-2196細胞類似產(chǎn)品：：HTori 3細胞、PANC3.27細胞、C1R細胞

NCI-H82細胞類似產(chǎn)品：：VSC4.1細胞、PT67細胞、H2108細胞

H1694細胞類似產(chǎn)品：：beta TC6細胞、TE671細胞、CCRF/CEM/0細胞

Anip 973細胞類似產(chǎn)品：：OE21細胞、CCD-966SK細胞、Co 115細胞

JVM3細胞類似產(chǎn)品：：NCI-SNU-761細胞、MDA-MB-231細胞、SH-SY5Y細胞

NCI-H2126細胞類似產(chǎn)品：：NCIH1651細胞、BNL-HCC細胞、H-441細胞

HEK-293-F細胞類似產(chǎn)品：：201T細胞、NCI-H1048細胞、STO細胞

NCI-H2195細胞類似產(chǎn)品：：Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細胞、HEK 293 EBNA細胞、VMCUB1細胞

Mino細胞類似產(chǎn)品：：EoL-1-cell細胞、LM6細胞、RPMI.8226細胞

SKBR-3細胞類似產(chǎn)品：：RPMI 1846細胞、NCIH2085細胞、RT-BM-1細胞

Vero C1008細胞類似產(chǎn)品：：COLO 206F細胞、SU 86.86細胞、TW01細胞

OPM2細胞類似產(chǎn)品：：KP-N-YN細胞、SKRC 39細胞、RSC-364細胞

SMMC7721細胞類似產(chǎn)品：：CTLA4Ig-24細胞、C-6細胞、GM07404細胞

AG06814-J細胞類似產(chǎn)品：：BAC1.2F5細胞、Pt K2細胞、LWnt-3A細胞

LTEP-s細胞類似產(chǎn)品：：IEC6細胞、CCRF-CEM/S細胞、TR 146細胞

SIRC細胞類似產(chǎn)品：：YD-15細胞、RPE-hTERT細胞、NIH 3T3細胞

Rainbow Trout Embryo細胞類似產(chǎn)品：：SupB15W細胞、BOWES細胞、TOG細胞

Panc-8_13細胞類似產(chǎn)品：：HUV-EC-C細胞、KMST6細胞、NCIH838細胞

HTR8svn細胞類似產(chǎn)品：：HCC-9204細胞、Panc3_27細胞、HT-144細胞

WSUDLCL2細胞類似產(chǎn)品：：CCC-HPF-1細胞、TE 32細胞、LAN5細胞

HS-766-T細胞類似產(chǎn)品：：HuCCT-1細胞、COLO 394細胞、ONS-76細胞

PC-3/M細胞類似產(chǎn)品：：184A1細胞、NCM356細胞、H1155細胞

GM01232E細胞類似產(chǎn)品：：P3.times.63 Ag8.653細胞、CATH.a細胞、RS 4;11細胞

Cor L88細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1573細胞、SW-900細胞、CV1細胞

Ramos-RA1細胞類似產(chǎn)品：：H-740細胞、H2052_MM細胞、870細胞

KHYG-1:人NK細胞淋巴瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

CCRF-CEM細胞類似產(chǎn)品：：SNU-601細胞、ZR-75-1細胞、OCLY8細胞

MRC-V細胞類似產(chǎn)品：：Human Pancreatic Duct Epithelial細胞、HSC 3細胞、HO8910細胞

Normal Rat Kidney-49F細胞類似產(chǎn)品：：A-172MG細胞、Tu177細胞、HCC-1419細胞

HCT FET細胞類似產(chǎn)品：：NBLAN5T細胞、MDCK supertube細胞、HO1-N-1細胞

RT4P細胞類似產(chǎn)品：：Hep 3B2細胞、DMS153細胞、FRhK-4細胞

CAKI1細胞類似產(chǎn)品：：Anip 973細胞、159 PT細胞、HTR8svn細胞

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