一、原理

是一種具有自主知識產(chǎn)權(quán)、獨特配方的新型油包

，用于免疫小鼠和家兔等實驗動物以制備單、

。該佐劑以

為基礎(chǔ)，添加了多種具有強免疫刺激活性的TLR配體。

與常規(guī)使用的弗氏佐劑相比，具有以下優(yōu)點：

（1）

活性強于弗氏不完全佐劑；

（2）與

不同，不含有干擾免疫應(yīng)答的無關(guān)蛋白成分；

（3）安全性好，副反應(yīng)率低；

（4）免疫針次少、抗原用量低等多方面優(yōu)點。

二、使用方法     

1.  用生理鹽水將抗原稀釋到

倍最終濃度（按小鼠每針次50μl、家兔每針次100μl用量配制）。備注：推薦使用的抗原用量為小鼠每針次10-20μg、家兔每針次20-50μg。

2.  用振蕩器充分混勻佐劑，無菌條件下取出所需用量（按小鼠每針次50μl、家兔每針次100μl）與抗原按體積比1:1混合，并用振蕩器劇烈振蕩5-10min，直至靜止放置10min水油相不分層。備注：與抗原混合前佐劑分層屬正常現(xiàn)象，但必須充分混勻后才能取用。

3.  通過皮下或肌肉單點注射免疫動物，小鼠每針次100μl，家兔每針次200μl。

（1）佐劑與抗原混合后應(yīng)盡快注射，若放置時間較長出現(xiàn)水油相分層，則必須按上述步驟2重新振蕩混勻；

（2）抽入針管前應(yīng)搖勻，抽入針管后應(yīng)盡快注射；

（3）盡量選擇引流淋巴結(jié)附近（如腋窩和腹股溝附近）的皮下或肌肉進行免疫。

4.  第21天按同樣方式加強免疫1針。備注：每次佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用。

5.  第35天采微量血進行

，

應(yīng)在1:10000-1:10000000范圍內(nèi)，隨后即可采全血或按常規(guī)方法進行抗原沖擊免疫和脾細胞融合。

6.  若抗體滴度沒有達到要求，可在第42天按同樣方式加強免疫1針。備注：通常情況下小鼠只需免疫2針，而家兔往往需要免疫3針。

7.  若免疫3針，可在第52-56天采微量血進行ELISA測定，

應(yīng)在1:10000-1:1000000范圍內(nèi)，隨后即可采全血或按常規(guī)方法進行抗原沖擊免疫和脾細胞融合。備注：佐劑免疫效果有時也與抗原特性有關(guān)，若免疫3針后仍達不到要求，不建議進行更多針次免疫。