PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
蛇形毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | Trichostongylus colubiformis | XGR97335 |
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的最高點。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性,無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性,有明顯的指數(shù)擴增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1. 陽性:有明顯的指數(shù)擴增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結(jié)果的解釋】
1. 實驗室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
2. 試劑運輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,可能會導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
具有下列特點:
1. 一站式,足夠 50 次酶切-連接反應(yīng)、50 次預(yù)擴反應(yīng)和 1600 次 AFLP PCR(PCR 按 30 uL 體系計算),但不包括 DNA 純化和帶型分析試劑(如 PAGE 電泳試劑和 銀染試劑)。
2. 本系列產(chǎn)品提供 EcoRI-MseI 組合,適用于 GC 含量在 50%以上的基因組。對 GC 含量在 50%以下的基因組,需從本公司采購 AFLP(EcoRI-TaqI)組合。
3. 各種參數(shù)都經(jīng)過優(yōu)化,一次 PCR 所得 AFLP 片段數(shù)一般在 10-100 之間,可重復(fù) 性好,誤差小于 0.6%。4. 本產(chǎn)品適用于基因組在 500 Mb-6000 Mb 的材料(如動物和植物),對于基因組 在 50-500 Mb 的材料(如細(xì)菌和真菌)或 50Mb 以下的材料(如質(zhì)粒,cosmid, BAC,YAC 和 PAC 等),需要分別另購專門的+1 型預(yù)擴引物混合液和+3 型 EcoRI 引物(8 種)AFLP 引物對。
實驗外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動物模型構(gòu)建
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細(xì)胞酮咯酸Ketorolac質(zhì)量規(guī)格:>98%
人B細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOS(RA.1) 大鼠胰腺星狀細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL來氟米特Leflunomide質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP31,BR
視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)來氟米特(標(biāo)準(zhǔn)品)Leflunomide質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 左氧氟沙星Levofloxacin Hemihidrated質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP34,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6左氧氟沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)Levofloxacin Hemihidrated質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
OK(負(fù)鼠腎小管細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2氯吡格雷Clopidogrel質(zhì)量規(guī)格:美國進口
Promocell C-27001 Osteoblast Growth Medium, 成骨細(xì)胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml氯吡格雷標(biāo)記d4Clopidogrel Labeled d4質(zhì)量規(guī)格:美國進口
甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)4-羥基卡唑4-Hydroxycarbazole質(zhì)量規(guī)格:>98%
FCGR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 CD32b / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 雌激素酮硫酸鹽,去氫表雄酮硫酸鈉Dehydroepiandrosterone-3-sulfate質(zhì)量規(guī)格:>98%
3T3 小鼠成纖維細(xì)胞纈更昔洛韋鹽酸鹽 Valganciclovir hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP
PLAT Others Human 人 tPAβ 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 5-硝基愈創(chuàng)木酚(植物激素級)質(zhì)量規(guī)格:>98%,植物激素級5-Nitroguaiacol
CL-0207SHG-44 (人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×26-溴-2-萘酚(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR6-Bromo-2-naphthol
PROCR Others Human 人 Epcr / PROCR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 6-(γ,γ-二甲基1丙基氨基)嘌呤核苷(植物激素級)質(zhì)量規(guī)格:>98%,植物激素級6-Dimethylallylamino purine riboside
小鼠食管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL6-甲基(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR6-Methylcoumarin
BNL CL.2小鼠胚胎肝細(xì)胞 BNL CL.2 mouse embryo liver cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS5-甲基-1,10-菲咯啉水合物(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)5-Methyl-1,10-phenanthroline Hydrate
蛇形毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒人腎皮質(zhì)上皮細(xì)胞裂解物HRCEpiCL馬鈴薯浸出芬,英文名或英文縮寫:Potato extract,級別:超,98%,規(guī)格:25U
IFNGR2 Others Mouse 小鼠 IFNGR2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 倍錄米 ≥99% BqCLOMqTHcSONq 4419-39-0
BHK-21 [C-13] 倉鼠腎成纖維細(xì)胞2-錄-4-硝基本-α-L-巖藻糖苷,英文名或英文縮寫:CNP-Afu,級別:標(biāo)準(zhǔn)溶液,100ug/ml,規(guī)格:100克
CL-0142LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞)5×106cells/瓶×2TRIS-TAPS-EDTA(TTE)BUFFER,10XTTE緩沖液,DNA測序用超級100MLRT
細(xì)胞名稱93-05-0N.N-二乙基對本N,N-Dietxyl-1,4-pxenylenediamine
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
關(guān)鍵字: 蛇形毛圓線蟲探;探針法;熒光定量PCR試劑盒;Trichostongylus colu;XGR97335;
上海西格生物科技有限公司( Shanghai Sig Biotechnology Co., Ltd)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海西格生物科技有限公司(Shanghai Sig Biotechnology Co., Ltd)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
公司秉承“專注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),力求為我國科研事業(yè)更好的,更專業(yè)的服務(wù)!
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