熒光染料的優(yōu)點:
使用簡便;
可以與任何PCR產物結合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。
總的來說,SYBR Green I方法是一種最基礎也最常用的Real-time qPCR實驗手段。
產品名稱 |
白鱘虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 |
Shovenose Sturgeon Iridovirus(SSIV) |
貨號 |
XGR97225 |
熒光化學物質:
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人內皮糖蛋白(ENG)酶聯免疫吸附測定試劑盒 別稱:CD105, END, HHT1, ORW, ORW1 Human ENG(Endoglin) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組ENG濃度
CF32362 NHBE-Bronchial Epi w/o RA, BEGM, amp Clonetics cells AMP
CF3236M CASMC-Coronary Artery SM SmGM-2, cryoamp Clonetics cells AMP
CF3236M UtSMC-Uter Smooth Mus SmGM-2, cryo amp Clonetics cells AMP
CF3236M D-AoSMC-Human Aortic Sm Mus-Diab Typ I Clonetics cells AMP
CF32367 HMVEC-L-Lung MV Endo ,EGM-2MV, amp Clonetics cells AMP
人胚腎細胞(293衍生)Amiodarone hydrochloride197742鹽酸胺碘酮
Hela1 flaskAminophylline3174氨茶堿
人宮頸癌細胞Aminophenazone585
UBC-MSC1 flaskAmbroxol hydrochloride238282鹽酸氨溴索
人臍帶間充質干細胞Ambrisentan17364安倍生坦
3-Allylrhodanine 中文名:3-烯丙基羅丹寧 分子式:C6H7NOS2 血小板衍化生長因子 -AA(PDGF-AA) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 美國 R&D
3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione 中文名: 分子式:C8H8O4 血小板衍化生長因子 -AB(PDGF-AB) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 美國 R&D
3-Acetylcoumarin 中文名:3-乙?;愣顾?nbsp; 分子式:C11H8O3 血小板衍化生長因子 -BB(PDGF-BB) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 美國 R&D
3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene 中文名: 分子式:C6H4Cl2OS 血糖含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
白鱘虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒3-[4-[(2-Chloro-5-iodophenyl)methyl]phenoxy]tetrahydro-furan 中文名: 分子式:C17H16ClIO2 植物可溶性糖含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
產品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
關鍵字: 白鱘虹彩病毒探;探針法;熒光定量PCR試劑盒;Shovenose Sturgeon I;XGR97225;
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