熒光染料的優(yōu)點:
使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。
總的來說,SYBR Green I方法是一種最基礎也最常用的Real-time qPCR實驗手段。
產(chǎn)品名稱 |
白堊立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 |
Rickettsia gravesii |
貨號 |
XGR97171 |
熒光化學物質(zhì):
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人骨橋素(OPN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 別稱:SPP1, BNSP, BSP1, ETA-1, Bone Sialoprotein I, Secreted Phosphoprotein 1, Early T-Lymphocyte Activation 1 Human OPN(Osteopontin) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組OPN濃度
Med 199 w/EBSS, L-Gln w/25 mM Hepe 500ml Media BOT
Ham's F-12 w/ L-Glutamine 500ml Media BOT
Medium 199 w/ EBSS 500ml Media BOT
Gentamicin 10 mg/ml 1 x 10 ml screw cap Media BOT
HBSS w/o PR, Ca or Mg 500ml Media BOT
麻痹性貝類毒素(PSP)ELISA試劑盒96TLoratadine797945氯雷他定
腹瀉性貝類毒素(DSP)ELISA試劑盒96TLoperamide hydrochloride345523鹽酸洛哌丁胺
健忘性貝類毒素(ASP)ELISA試劑盒96TLonidamine2649氯尼達明
流行性出血熱病毒 EHDV—抗體檢測 ELISA試劑盒96TLomefloxacin hydrochloride9792鹽酸洛美沙星
羥基丁酸 ELISA試劑盒96TLithocholic acid4343石膽酸
4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone 中文名:4-丙烯氧基-2-羥基二苯甲酮 分子式:C16H14O3 鴨子酶(CA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
4-Acetamidophenol 中文名:對乙酰氨基酚 分子式:C8H9NO2 中文名稱 方法 規(guī)格
白堊立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide 中文名: 分子式:C16H21N3O4S 鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISAKit ELISA. 96T/48T
4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 中文名: 分子式:C16H16N4O3 雞17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISAKit ELISA. 96T/48T
4-[(4-Methylpiperazin-1-yl) methyl]benzoic acid di 中文名:甲磺酸伊馬替尼 分子式:C13H20Cl2N2O2 鴨子胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
關鍵字: 白堊立克次氏體探;探針法;熒光定量PCR試劑盒;Rickettsia gravesii;XGR97171;
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