PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號 |
犬附紅細胞體(犬嗜血支原體)探針法熒光定量PCR試劑盒 |
Eperythrozoon perekropovi |
XGR96711 |
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應比最早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的最高點。
【質(zhì)控標準】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應為陰性,無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應為陽性,有明顯的指數(shù)擴增期,Ct值應小于等于35;
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1. 陽性:有明顯的指數(shù)擴增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復核一次,若復核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結(jié)果的解釋】
1. 實驗室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
2. 試劑運輸、保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,可能會導致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
具有下列特點:
1. 一站式,足夠 50 次酶切-連接反應、50 次預擴反應和 1600 次 AFLP PCR(PCR 按 30 uL 體系計算),但不包括 DNA 純化和帶型分析試劑(如 PAGE 電泳試劑和 銀染試劑)。
2. 本系列產(chǎn)品提供 EcoRI-MseI 組合,適用于 GC 含量在 50%以上的基因組。對 GC 含量在 50%以下的基因組,需從本公司采購 AFLP(EcoRI-TaqI)組合。
3. 各種參數(shù)都經(jīng)過優(yōu)化,一次 PCR 所得 AFLP 片段數(shù)一般在 10-100 之間,可重復 性好,誤差小于 0.6%。4. 本產(chǎn)品適用于基因組在 500 Mb-6000 Mb 的材料(如動物和植物),對于基因組 在 50-500 Mb 的材料(如細菌和真菌)或 50Mb 以下的材料(如質(zhì)粒,cosmid, BAC,YAC 和 PAC 等),需要分別另購專門的+1 型預擴引物混合液和+3 型 EcoRI 引物(8 種)AFLP 引物對。
實驗外包:
1.基因組學:基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析
2.轉(zhuǎn)錄組學:microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細胞分選
7.代謝組學:GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型:原代細胞、細胞模型、動物模型構(gòu)建
流丙靈(甲丙流靈 流草滌標準品 流蟲畏標準品 HumanCyclophosphamide,CTXELISA試劑盒人環(huán)磷酰胺(CTX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T M17瓊脂 M17 Agar 250 用于牛奶和乳制品中乳酸菌檢測和分離培養(yǎng)(Merck方法) MEF-7/Adr細胞,腺癌阿霉素耐藥株 人卵巢癌細胞,HOC1細胞 人成纖維細胞裂解物HMFL eetonitnILE*NOAIRSHIPMENT*以HPLC級4L1975-5-8RT
HuMantenidine 胡蔓藤減 114027-39-3 ELISAKitTGF-β1犬轉(zhuǎn)移生長因子β1規(guī)格:48T/96T 大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 1000ml 大腸桿菌顯色培養(yǎng)基用于大腸桿菌的快速檢測和計數(shù) HUVEC-c Growth Medium 2single donor 500,000cells 肺成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) BENZAMIDINExy7noCHLORIDE芐脒,HCl蛋白組學級25G1670-14-0COLD
犬附紅細胞體(犬嗜血支原體)探針法熒光定量PCR試劑盒HuMantenidine 胡蔓藤減 114027-39-3 ELISAKitTGF-β1犬轉(zhuǎn)移生長因子β1規(guī)格:48T/96T 大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 1000ml 大腸桿菌顯色培養(yǎng)基用于大腸桿菌的快速檢測和計數(shù) HUVEC-c Growth Medium 2single donor 500,000cells 肺成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) BENZAMIDINExy7noCHLORIDE芐脒,HCl蛋白組學級25G1670-14-0COLD
Borphanol Tarate CIV布托諾啡諾標準品58786-99-5500mg布托諾啡諾標準品 CLIAKitforMIGF/CXCL9(Humanmonocyteierferongammainducingfactor)ELISAKit人γ干擾素誘導單核細胞因子規(guī)格:48T/96T 葡萄糖銨瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于志賀氏菌生化試驗incubationmedia葡萄糖銨瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于志賀氏菌生化試驗 U251細胞,人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞 近平滑假絲酵母 人海馬趾神經(jīng)元RNAHN-h miRNA5 μg β-淀粉酶 β-Amylase from sweet potato 9000-91-3 100G 培養(yǎng)基
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。