以下是小鼠腸微血管細(xì)胞提取物圖片的訂購(gòu)信息:
產(chǎn)品名稱(chēng)
|
規(guī)格
|
貨號(hào)
|
小鼠腸微血管細(xì)胞提取物圖片
|
詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
|
FSX6779
|
小鼠腸微血管細(xì)胞提取物是從小鼠腸微血管細(xì)胞提取的,小鼠腸微血管細(xì)胞從正常小鼠腸微血管組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來(lái)合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腸微血管組織裂解液,離心去除組織碎片,通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi);
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
2-碘-5-甲基噻吩Human Smad4/MADH4(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 4) ELISA Kit
咪唑啉Human SMN1(Survival of Motor Neuron 1, Telomeric) ELISA Kit
咪唑啉Human SMRP(Soluble Mesothelin Related Peptide) ELISA Kit
聚氧代乙烯(5)壬基苯基醚,支化Human SNCγ(Synuclein Gamma) ELISA Kit
聚氧代乙烯(5)壬基苯基醚,支化Human SPA(Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit
椰油酰兩性基乙酸鈉Human SPD(Pulmonary Surfactant Associated Protein D) ELISA Kit
椰油酰兩性基乙酸鈉Human SPG(Surfactant Associated Protein G) ELISA Kit
椰油酰兩性基乙酸鈉Human SPTAN1(Alpha-Fodrin) ELISA Kit
四氧化三鐵Human SPTβN4(Spectrin Beta, Non Erythrocytic 4) ELISA Kit
納米四氧化三鐵Human sSELP(Soluble P-Selectin) ELISA Kit
納米四氧化三鐵Human SSTR1(Somatostatin Receptor 1) ELISA Kit
碘代正丁烷Human ST2(Syntenin 2) ELISA Kit
碘代正丁烷Human STAT1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1) ELISA Kit
醋酸銥Human STAT4(Signal Transducer and Activator of Transcription 4) ELISA Kit
1-(1-甲基乙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑Human STK39(Serine/Threonine Kinase 39) ELISA Kit
小鼠腸微血管細(xì)胞提取物圖片RV 沙氏增菌肉湯Rappaport Vassiliadis Salmonella EnrichmentBroth戊唑醇 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99% Ubiquitin Protein Ligase
木糖,賴(lài)氨酸,去氧膽酸鹽瓊脂Xylose, lysine, desoxycholate agar綠草定 分析標(biāo)準(zhǔn)品Aromatase
溴十六烷三甲銨瓊脂基礎(chǔ)Cetrimide agar base三十醇 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%arylhydrocarbon receptor
甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基Mannitol-Salt Agar Medium氟樂(lè)靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%NRTK
梭菌加強(qiáng)培養(yǎng)基Reinforced Medium for Clostridia氟樂(lè)靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3% UAG
哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ)Columbia Agar Base氟樂(lè)靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5% mast cell tryptase
瓊脂培養(yǎng)基 C含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂Sabouraud-glucose Agar with antibiotics殺蟲(chóng)脲 分析標(biāo)準(zhǔn)品mast cell carboxypeptidase
肉湯培養(yǎng)基 D水合乳糖肉湯Lactose Monohydrate Broth殺蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:異丙醇o(jì)bestatin
肉湯培養(yǎng)基 I四硫磺酸鹽膽鹽亮綠肉湯Tetrathionate Bile Brilliant Green BrothTBG Broth殺蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:異丙醇FTO
瓊脂培養(yǎng)基 J去氧膽酸檸檬酸瓊脂2,6-二甲基-4-十三烷基嗎啉 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%Antigens of lung cancer
瓊脂培養(yǎng)基 L亮綠,酚紅,水合乳糖,蔗糖瓊脂Brilliant Green, Phenol red, Lactose Monohydrate, Sucrose Agar苯磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品,95%Pulmonary surfatcant-associated protein A
瓊脂培養(yǎng)基 M三糖鐵瓊脂Triple Sugar, Iron Agar禾草丹 分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%Pulmonary surfatcant-associated protein A2
甘油Glycerin滅菌唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.2%Pulmonary surfatcant-associated protein B
關(guān)鍵字: 小鼠腸微血管細(xì)胞提取物;FSX6779;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷(xiāo)售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷(xiāo)售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專(zhuān)門(mén)針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對(duì)各種動(dòng)物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚(yú))的科研試劑。
公司秉承“專(zhuān)注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),力求為我國(guó)科研事業(yè)更好的,更專(zhuān)業(yè)的服務(wù)!
公司售后服務(wù)宗旨:有質(zhì)量問(wèn)題可申請(qǐng)退換,有技術(shù)疑問(wèn)可隨時(shí)給于解答,一對(duì)一的客服服務(wù),客戶(hù)的需求也是我們不斷的更新服務(wù)。