以下是小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞提取物說明書的訂購信息：

小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代腎小球內(nèi)皮細(xì)胞提取的，小鼠原代腎小球內(nèi)皮細(xì)胞從正常小鼠腎小球組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腎小球內(nèi)皮組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一分離與培養(yǎng)：
    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
    1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
    2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
    5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
    6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
異煙酸Human PLAA(Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit

伊曲康唑Human PLB(Phospholipase B) ELISA Kit

伊曲康唑Human PLCγ1(Phospholipase C Gamma 1) ELISA Kit

異噁唑Human PLCγ2(Phospholipase C Gamma 2, Phosphatidylinositol Specific) ELISA Kit

異噁唑Human PLGA(Plasminogen Activator) ELISA Kit

異煙肼Human PLOD3(Procollagen Lysine-2-OxoglutaRate-5-Dioxygenase 3) ELISA Kit

異煙肼Human PLSCR2(Phospholipid Scramblase 2) ELISA Kit

5-肌苷一磷酸二鈉鹽Human PLTP(Phospholipid Transfer Protein) ELISA Kit

3-碘-9苯基咔唑Human PLVAP(Plasmalemma Vesicle Associated Protein) ELISA Kit

3-碘-9苯基咔唑Human pTAU(phosphorylated microtubule-associated protein tau) ELISA Kit

碘海醇Human pNF-H(Phosphorylated Neurofilament H) ELISA Kit

碘海醇Human PP(Pepsin) ELISA Kit

碘海醇Human PP13(Placental Protein13) ELISA Kit

碘海醇Human PPAR-α(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit

吲哚美辛Human PPAR-γ(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit
小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞提取物說明書馬丁瓊脂二甲戊樂靈標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:丙酮MG7Ag

肝湯瓊脂二甲戊樂靈標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:丙酮Single-stranded DNA-binding protein

胰蛋白月示瓊脂猛殺威 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.5%cholesterol

結(jié)晶紫染色液咪鮮胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品，95.5%cholesterol ester

明膠培養(yǎng)基咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:甲苯Choline acetyltransferase

葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基G.P咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:甲苯cholinesterase

pH7.2 磷酸鹽緩沖液Phosphate Buffer Solution pH7.2嘧霉胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.5%cholicacid

酪胨-大豆卵磷脂-吐溫 20 液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)Fluid  Casein  Digest-Soy  Lecithin-Polysorbate  20Medium Base甜菜寧 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%Bile acide

吐溫 20Polysorbate 20戊菌隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%elastin

大豆-酪蛋白消化物瓊脂Soybean-Casein Digest Agar嘧啶肟草醚 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%Elastasee

大豆-酪蛋白消化物肉湯Fluid Soybean-Casein Digest Broth氯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%，基體：正己烷PIN1

沙氏葡萄糖瓊脂Sabouraud Dextrose Agar氯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%，基體：石油醚Protein C

沙氏葡萄糖肉湯Sabouraud Dextrose Broth對(duì)硫磷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%（劇毒品）Protein S