以下是人椎間盤髓核細胞提取物圖片的訂購信息:
產品名稱
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規(guī)格
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貨號
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人椎間盤髓核細胞提取物圖片
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詳見說明書
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FSX6659
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人椎間盤髓核細胞提取物是從人椎間盤髓核細胞提取的,人椎間盤髓核細胞從正常人椎間盤髓核組織制備。正常人椎間盤髓核組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人椎間盤髓核組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
實驗報告:
一分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
乙酰羥肟酸乙酯Human PPARGC1A(Peroxisome prolifeRator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha) ELISA Kit
乙二醇雙(2-氨基乙基醚)四乙酸Human SLC26A4(Pendrin) ELISA Kit
乙二醇雙(2-氨基乙基醚)四乙酸Human TXNIP(Thioredoxin-interacting protein) ELISA Kit
乙二醇雙(2-氨基乙基醚)四乙酸Human TSTA3(GDP-L-fucose synthase) ELISA Kit
酒石酸腎上腺素Human B3GALT1(Beta-1,3-galactosyltransferase 1) ELISA Kit
酒石酸腎上腺素Human TTF1(Transcription Termination Factor, RNA polymerase I) ELISA Kit
酒石酸腎上腺素Human B3GALT2(Beta-1,3-galactosyltransferase 2) ELISA Kit
2-溴異丁酸乙酯Human DNM2(Dynamin-2) ELISA Kit
2-肟氰乙酸乙酯Human C19orf80(Betatrophin) ELISA Kit
2-肟氰乙酸乙酯Human TWIST1(Twist-related protein 1) ELISA Kit
4-氧代環(huán)己烷乙酸乙酯Human TXK(Protein tyrosine kinase 4) ELISA Kit
4-氧代環(huán)己烷乙酸乙酯Human TXNDC5(Thioredoxin domain-containing protein 5) ELISA Kit
5-溴戊酸乙酯Human SFRP1(Secreted frizzled-related protein 1) ELISA Kit
5-溴戊酸乙酯Human BAI3(Brain-specific angiogenesis inhibitor 3) ELISA Kit
5-溴戊酸乙酯Human HTT(Huntingtin) ELISA Kit
人椎間盤髓核細胞提取物圖片 山奈苷丁二酸 AR,99.5%MGP ELISA Kit
商陸皂苷甲氫氧化鈉 AR,96%lumican,LUM ELISA Kit
商陸皂苷元氫氧化鈉 GR,97%,片狀ATP2A1 ELISA Kit
芍藥苷三氟乙酸 AR,99.0%Myostatin ELISA Kit
芍藥內酯苷三氟乙酸 測序專用dystrophin ELISA Kit
蛇床子素三氟乙酸 for HPLC, ≥99.5% (GC)myogenin ELISA Kit
射干苷三氟乙酸 for LC-MS, ≥99.5%Creatine Kinase MM isoenzyme,CK-MM ELISA Kit
升麻素三氟乙酸酐(TFAH) 衍生級 (for GC), ≥99.0% (GC)Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit
升麻素苷硫代乙醇酸 AR,90.0%creatine kinase BB isoenzyme,CK-BB ELISA kit
圣草次苷1,1,1-三氟丙酮 97%MUSK Ab ELISA Kit
石吊蘭素三乙基硼四氫呋喃溶液 1M 四氫呋喃溶液myosin light chain kinase,MLCK ELISA Kit
石杉堿丙3-巰基-1,2-丙二醇 95%Myosin,MYS ELISA Kit
石杉堿甲3-巰基-1,2-丙二醇 97%,用于細胞培養(yǎng)Myotonin-protein kinase,DMPK ELISA kit
關鍵字: 人椎間盤髓核細胞提取物;FSX6659;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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