細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務(wù)標準。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
實驗報告：
一分離與培養(yǎng)：
    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
    1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
    2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
    5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
    6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
2,6-二氯吡啶-3-羧酸Human MKI67(Antigen KI-67) ELISA Kit

D-(+)-海藻糖,二水合物Human DKK4(Dickkopf-related protein 4) ELISA Kit

D-(+)-海藻糖,二水合物Human TNFRSF10A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A) ELISA Kit

D-(+)-海藻糖,二水合物Human BCAM(Basal cell adhesion molecule) ELISA Kit

D-海藻糖二水Human FGG(Fibrinogen gamma chain) ELISA Kit

3,6-二溴噠嗪Human VIP(VIP peptides) ELISA Kit

3,6-二溴噠嗪Human β-EP(Beta-Endorphin) ELISA Kit

5-(4-溴苯基)-4,6-二氯嘧啶Human LRP2(Low-density lipoprotein receptor-related protein 2) ELISA Kit

5-(4-溴苯基)-4,6-二氯嘧啶Human CTGF(Connective tissue growth factor) ELISA Kit

正丁基二(1-金剛烷基)膦Human BMPR1A(Bone morphogenetic protein receptor type-1A) ELISA Kit

正丁基二(1-金剛烷基)膦Human XCR1(Chemokine XC receptor 1) ELISA Kit

正丁基二(1-金剛烷基)膦Human CXCR1(C-X-C chemokine receptor type 1) ELISA Kit

2,4-二氯嘧啶Human CORO1A(Coronin-1A) ELISA Kit

2,4-二氯嘧啶Human IHH(Indian hedgehog protein) ELISA Kit

DL-硫辛酸Human EPOR(Erythropoietin receptor) ELISA Kit
人乳腺MatchPair™:乳腺上皮細胞和腫瘤原代細胞圖片Anti-GAD  谷氨酸脫羧酶抗體（間接法二步法）硝酸銀 99.99% metals basisEndogenous Secretory Receptor for Advanced Glycation Endproducts,esRAGE ELISA Kit

anti-DNase B(Human anti-deoxyribonuclease B) ELISA Kit  人抗DNA酶B抗體硝酸銀  ACS, ≥99.0%Endothelial lipase,EL ELISA Kit

anti-CMV IgM(Human anti-cytomegalovirus IgM antibody) ELISA Kit  人抗巨細胞病毒抗體IgM硝酸銀標準溶液 0.1017mol/LEndostatin,ES ELISA Kit

anti-CMV IgG(Human anti-cytomegalovirus IgG antibody,anti-CMV IgG) ELISA Kit  人抗巨細胞病毒抗體IgG硝酸銀標準溶液 0.1000mol/L(0.1N)Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA Kit

ANP(Mouse Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit  小鼠心鈉肽硝酸銀標準溶液 0.01000mol/L(0.01N)endothelial cell-specific molecule 1,ESM-1 ELISA Kit

ANP(Human Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit  人心鈉肽氧化銀 99.99% metals basisEndothelin-2,EDN2 ELISA Kit

Annexin A2 human c ELISA Kit   人膜粘連蛋白 Ⅱ ELISA 試劑盒二氯四氨鈀 Pd ≥43.0%EDNRA ELISA Kit

ANNA-2/Ri(Human neuronal nuclear autoantibody) ELISA Kit  人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體硝酸鉈 99.5%（劇毒品）Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit

ANNA-1/Hu(Human neuronal nuclear autoantibody) ELISA Kit  人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體硝酸鉈 99.999%（劇毒品）Endomorphin-2,EM-2 ELISA Kit

ANKRD1(Human cardiac ankyrin repeat domain 1) ELISA Kit  人心肌錨蛋白重復(fù)域1硝酸鉈 98%（劇毒品）Mothers against decapentaplegic homolog 4,Smad4 ELISA Kit

ANG-R-Tie1 ELISA Kit  大鼠血管生成素受體Tie1N-乙基-N-芐基苯胺 98%terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT ELISA Kit

ANGPTL3(Human angiopoietin-like protein 3) ELISA Kit  人血管生成素樣蛋白32-羥丙基-β-環(huán)糊精 97%TCC C5b-9 ELISA Kit

ANGA(Human anti-neutrophil granules antibody) ELISA Kit  人抗中性粒細胞顆粒抗體3-氯-2-甲基苯胺 99%Humna ANPEP ELISA Kit
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.