培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
以下是大鼠小梁網(wǎng)細胞說明書的訂購信息：

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務(wù)標準。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
十二烷Human TNFRSF11A/RANK(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A) ELISA Kit

利多卡因Human TNFRSF13B/TACI(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B) ELISA Kit

利多卡因Human TNFRSF13C/BAFFR(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C) ELISA Kit

利多卡因Human TNFRSF14/HVEM(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14) ELISA Kit

草酸二乙酯Human TNFRSF4/OX40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4) ELISA Kit

2,4-二氨基-6-苯基-1,3,5-三嗪Human TNFRSF5/CD40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5) ELISA Kit

2,4-二氨基-6-苯基-1,3,5-三嗪Human TNFRSF9/4-1BB(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9) ELISA Kit

直接紅80Human TNFSF11/RANKL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11) ELISA Kit

3,3-二氨基聯(lián)苯胺 四鹽酸鹽Human TNFSF13/APRIL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13) ELISA Kit

3,3-二氨基聯(lián)苯胺 四鹽酸鹽Human TNFSF14/LIGHT(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 14) ELISA Kit

3,4-二羥基苯甲醛Human TNFSF4/OX40L(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4) ELISA Kit

3,4-二羥基苯甲醛Human TNFSF18(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18) ELISA Kit

3,4-二羥基苯甲醛Human TrkA/NTRK1(High affinity nerve growth factor receptor) ELISA Kit

2-雙環(huán)己基膦-2 '-甲基聯(lián)苯Human TSLP(Thymic stromal lymphopoietin) ELISA Kit

2-雙環(huán)己基膦-2 '-甲基聯(lián)苯Human PLAU/uPA(Urokinase-Type Plasminogen Activator) ELISA Kit
大鼠小梁網(wǎng)細胞說明書BFP(Human basic fetoprotein,BFP) ELISA Kit  人堿性胎兒蛋白甲基丙烯酸十八烷基酯 96%Tetratricopeptide repeat protein 1,TTC1/TPR1 ELISA kit

bFGF-9(Human basic fibroblast growth factor 9) ELISA Kit  人堿性成纖維細胞生長因子9三羥甲基丙烷 98%Trifunctional enzyme subunit beta, mitochondrial你

bFGF-9 ELISA Kit  大鼠堿性成纖維細胞生長因子92，5-二氫呋喃 97%Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit

bFGF-6(Human basic fibroblast growth factor 6) ELISA Kit  人堿性成纖維細胞生長因子63,4-二氫-2H-吡喃 98%paramyxovirus parotitis IgM ELISA Kit

bFGF-6 ELISA Kit  大鼠堿性成纖維細胞生長因子62,3-二氫呋喃 99%paramyxovirus parotitis IgG ELISA Kit

bFGF-4(Human basic fibroblast growth factor 4) ELISA Kit  人堿性成纖維細胞生長因子4四氫吡喃 99%Cartilage glycoprotein 39,HC gp-39 ELISA Kit

bFGF-4 ELISA Kit  大鼠堿性成纖維細胞生長因子4蘆薈寧 分析標準品，≥99%COMP ELISA Kit

bFGF(Human basic fibroblast growth factor) ELISA Kit  人堿性成纖維細胞生長因子氯乙酸乙酯 AR,99% milk fat globule-EGF factor 8 protein,MFGE8 ELISA kit

bFGF ELISA Kit  大鼠堿性成纖維生長因子蘆薈寧 分析標準品，≥99%mammary carcinoma marker CA15-3,CA15-3 ELISA kit

bFGF (Rabbit basic fibroblast growth factor) ELISA Kit  兔子堿性成纖維細胞生長因子脫水淫羊藿素 分析標準品,≥99%(HPLC)papillomavirus antibody ELISA Kit

b-FABP(Human brain fatty acid binding protein) ELISA Kit  人腦型脂肪酸結(jié)合蛋白乙酸龍腦酯 分析標準品papillomavirus antibody IgM ELISA Kit

BF(Mouse factor B) ELISA Kit  小鼠B因子馬錢子堿 分析標準品（劇毒品）papillomavirus IgG ELISA Kit

BF(Human factor B) ELISA Kit  人B因子補骨脂二氫黃酮甲醚 分析標準品，≥98%papillomavirus type 18 L1-capsids你
實驗報告：
一分離與培養(yǎng)：
    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
    1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
    2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
    5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
    6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。