細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
以下是人腦動脈血管平滑肌細胞圖片的訂購信息：

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標(biāo)準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務(wù)標(biāo)準。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
實驗報告：
一分離與培養(yǎng)：
    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
    1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
    2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
    5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
    6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
2-溴-6-(二氟甲基)吡啶anti- RPS4X antibody

2-溴-6-(二氟甲基)吡啶anti- RPS4Y1 antibody

2-溴-6-(二氟甲基)吡啶anti- RPS5 antibody

2-溴-6-(二氟甲基)吡啶anti- RPS6 antibody

2-溴-6-(二氟甲基)吡啶anti- RPS6KL1 antibody

2-溴-6-(二氟甲基)吡啶anti- RPS7 antibody

6-溴-2-甲基喹啉anti- RPS8 antibody

6-溴-2-甲基喹啉anti- RPS9 antibody

苯并咪唑anti- RQCD1 antibody

苯并咪唑anti- RRAGB antibody

甲磺酸(2-二環(huán)己基膦-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯(lián)苯)(2'-氨基-1,1'-聯(lián)苯基-2-基)鈀(II)anti- RRAS antibody

甲磺酸(2-二環(huán)己基膦-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯(lián)苯)(2'-氨基-1,1'-聯(lián)苯基-2-基)鈀(II)anti- RRAS2 antibody

甲磺酸(2-二環(huán)己基膦-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯(lián)苯)(2'-氨基-1,1'-聯(lián)苯基-2-基)鈀(II)anti- RRBP1 antibody

甲磺酸(2-二環(huán)己基膦-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯(lián)苯)(2'-氨基-1,1'-聯(lián)苯基-2-基)鈀(II)anti- RRM1 antibody

甲磺酸(2-二環(huán)己基膦-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯(lián)苯)(2'-氨基-1,1'-聯(lián)苯基-2-基)鈀(II)anti- RRM1 antibody
人腦動脈血管平滑肌細胞圖片sCD38(Human Soluble Cluster of differentiation 38) ELISA Kit  人可溶性CD38氯乙酰氯 CP,97%Mus musculus (Mouse)

sCD30L(Mouse Soluble Cluster of differentiation 30 ligand) ELISA Kit  小鼠可溶性CD30配體乙基乙二酰氯酯 98%Homo sapiens (Human)

sCD30L(Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand) ELISA Kit  人可溶性CD30配體草酰氯 98%Homo sapiens (Human)

sCD30L ELISA Kit  大鼠可溶性CD30配體氧氯化磷 AR,99.0% (劇毒品)Homo sapiens (Human)

sCD30(Mouse soluble cluster of differentiation 30) Elisa Kit  小鼠可溶性CD30氧氯化磷 電子級（劇毒品）Homo sapiens (Human)

sCD28(human soluble cluster of differentiation 28) ELISA Kit  人可溶性CD28度米芬 97%Homo sapiens (Human)

sCD14 ELISA Kit  大鼠可溶性CD14環(huán)胞霉素A 98%Rattus norvegicus (Rat)

SCCAg(Human squamous cell carcinoma related antigen) ELISA Kit  人鱗狀細胞癌相關(guān)抗原2,3-二甲氧基苯甲酸 99%Mus musculus (Mouse)

SCA(Human steroid producing cell autoantibody) ELISA Kit  人抗類固醇生成細胞抗體3,4-二甲氧基苯甲酸 99%Homo sapiens (Human)

Sc1-70-Ab(Human Sc1-70 Antibody) ELISA Kit  人抗Sc1-70抗體2,4-二羥基苯甲酸 98%Homo sapiens (Human)

SC(Human secretory component) ELISA Kit  人分泌成分3,4-二羥基苯甲醛 98%Rattus norvegicus (Rat)

SAP(Human Serum amyloid P) ELISA Kit  人血清淀粉樣蛋白P3,4-二羥基苯甲醛 分析標(biāo)準品，≥99%Mus musculus (Mouse)

Sam(Human soluble adhesion molecules) ELISA Kit  人可溶性粘附分子異香蘭酸 97%Rattus norvegicus (Rat)
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.