PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:鵝源性成分(Goose)核酸試劑盒
英文名稱:詳見說明書
編號: FSP3040
分類:核酸檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
Human MPHOSPH10 (U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein MPP10) ELISA KITMouse PTHrP(PaRathyroid Hormone Related Protein) ELISA Kit甲基氯化鎂 溶液ATP酶法冰凍切片動物肌肉組織分型染色試劑盒
Human PRX(Periaxin) ELISA KitMouse PTN(Pleiotrophin) ELISA Kit氯化鎂,六水合物冰凍切片NADH心肌黃酶(NADH-TR)活性染色試劑盒
Human MKX(Homeobox protein Mohawk) ELISA KitMouse PTPRN(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit甘油單油酸酯全組織NADH心肌黃酶(NADH-TR)活性染色試劑盒
Human MARCO (Macrophage receptor MARCO) ELISA KITMouse PVRL2(Poliovirus Receptor Related Protein 2) ELISA Kit甘油單油酸酯冰凍切片琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒
Human MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) ELISA KitMouse PYGL(Glycogen Phosphorylase, Liver) ELISA KitRuPhos Pd G3全組織琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒
Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) ELISA KITMouse PYGM(Glycogen Phosphorylase, Muscle) ELISA KitRuPhos Pd G3冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒
Human SEMG1(Semenogelin-1) ELISA KitMouse RARS(Arginyl tRNA Synthetase) ELISA KitRuPhos Pd G3全組織細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒
Human MAD1L1(Mitotic arrest deficient 1-like protein 1) ELISA KitMouse RasGAP(Ras GTPase Activating Protein) ELISA KitRuPhos Pd G3冰凍切片細胞色素C氧化酶和琥珀酸脫氫酶(Combined COX-SDH)雙酶活性染色試劑盒
鵝源性成分(Goose)核酸試劑盒Rhesus antibody Rh ZNRF3 鋅指蛋白3/環(huán)指蛋白3抗體
Anti-Cyclin E/FITC 熒光素標記周期素E/原癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Fish Oste ocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA kit 魚骨鈣素/骨谷氨酸蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-DDAH-II /FITC 熒光素標記雙甲基精氨酸水解酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CYP19/CYP19A1 細胞色素P450 19抗體 規(guī)格 0.1ml
Rat IgG/FITC 熒光素FITC標記大鼠IgG(細胞流式同型對照) 0.3ml
Phospho-LKB1(Thr189) 英文名稱: 磷酸化絲酸/蘇酸蛋白激酶抗體 0.1ml
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關鍵字: 鵝源性成分(Goose);核酸試劑盒;48T;FSP3040;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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