PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:兔黏液瘤病毒(RMV)核酸定量試劑盒
英文名稱:詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
編號(hào): FSP2913
分類:核酸檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí),吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
Human FOLR2(Folate receptor beta) ELISA KitHorse ADP(Adiponectin) ELISA Kit鼠李糖 組蛋白H4-K12乙酰化檢測(cè)試劑盒
Human B4GALT5(Beta-1,4-galactosyltransferase 5) ELISA KitHorse PAI2(Plasminogen Activator Inhibitor 2) ELISA Kit鼠李糖 組蛋白H4-K16乙?;瘷z測(cè)試劑盒
Human CAMKK2(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2) ELISA KitHorse IL-4(Interleukin 4) ELISA KitL-鼠李糖 組蛋白H2B-K46甲基化(di)檢測(cè)試劑盒
Human CBLB(E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B) ELISA KitHorse FSH(Follicle Stimulating Hormone) ELISA KitL-肌肽 組蛋白H3-K4(mono/di/tri)甲基化檢測(cè)試劑盒
Human CD5L(CD5 antigen-like) ELISA KitHorse LH(Luteinizing Hormone) ELISA KitL-肌肽 組蛋白H3-K9(mono/di/tri)甲基化檢測(cè)試劑盒
Human FAM3B(Protein FAM3B) ELISA KitHorse IgG(Immunoglobulin G) ELISA KitL-脯氨酸甲酯鹽酸鹽 組蛋白H3-K18(mono)甲基化檢測(cè)試劑盒
Human MYOF(Myoferlin) ELISA KitHorse TF(Tissue Factor) ELISA KitL-脯氨酸甲酯鹽酸鹽 組蛋白H3-K23甲基化(mono/di)檢測(cè)試劑盒
Human GFRA1(GDNF family receptor alpha-1) ELISA KitHorse ANX5(Annexin 5) ELISA Kit4-異丙基甲苯 組蛋白H3-K27(mono/di/tri)甲基化檢測(cè)試劑盒
兔黏液瘤病毒(RMV)核酸定量試劑盒DiSBAC2(3) 20mg 101509-27-7Rat Neuron-specific enolase, NSE Elisa KitHPLC95%DiSBAC2(3) 20mgFXIIa進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于空腸彎曲菌的分離培養(yǎng)英文名稱:50mg重組人 PRTFDC1 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)促銷1041631-93-996T核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%DiSBAC2(3) 20mgFXIIa32042-43-6高端化學(xué)試劑Human Cyclin-D2 Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)彎曲桿菌的抗生素敏感性試驗(yàn)和純化培養(yǎng)英文名稱:Phenoxybenzamine Hydrochloride 250mg重組人 DPEP2 / MBD-2 蛋白 (His 標(biāo)簽)28028-62-896T早期生長(zhǎng)應(yīng)答因子4(EGR4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Oxonol V 20mgLutein32042-43-6高端化學(xué)試劑Human Cyclin-D1 Elisa Kit
Oxonol V 20mg 101-59-7Rat Neuron-specific enolase, NSE Elisa KitHPLC95%Oxonol V 20mgLutein進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)彎曲桿菌的抗生素敏感性試驗(yàn)和純化培養(yǎng)英文名稱:Phenoxybenzamine Hydrochloride 250mg重組人 DPEP2 / MBD-2 蛋白 (His 標(biāo)簽)28028-62-896T早期生長(zhǎng)應(yīng)答因子4(EGR4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Oxonol V 20mgLutein32042-43-6高端化學(xué)試劑Human Cyclin-D1 Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂的制備英文名稱:L-Phenylalanine 200mg重組人 BPHL 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)1221762-70-496T葡萄糖6酸脫氫酶(G6PD)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Oxonol VI 20mgGFR32042-43-6高端化學(xué)試劑Human Cyclin-D1 Elisa Kit
Oxonol VI 20mg 101-59-7Rat intercellular adhesion molecule 2, ICAM-2 Elisa KitHPLC95%Oxonol VI 20mgGFR進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂的制備英文名稱:L-Phenylalanine 200mg重組人 BPHL 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)1221762-70-496T葡萄糖6酸脫氫酶(G6PD)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Oxonol VI 20mgGFR32042-43-6高端化學(xué)試劑Human Cyclin-D1 Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于分離真菌,酵母菌等英文名稱:Meclofenamate Sodium500mg重組人 Dehydropeptidase-I / DPEP1 蛋白 (His 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷376361-87-496T葡萄糖6酸脫氫酶(G6PD)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%RH 23720mgRRM24320-30-3高端化學(xué)試劑Human Endostatin, ES Elisa Kit
RH 23720mg 1016-05-3Rat intercellular adhesion molecule 2, ICAM-2 Elisa KitHPLC95%RH 23720mgRRM2進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于分離真菌,酵母菌等英文名稱:Meclofenamate Sodium500mg重組人 Dehydropeptidase-I / DPEP1 蛋白 (His 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷376361-87-496T葡萄糖6酸脫氫酶(G6PD)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%RH 23720mgRRM24320-30-3高端化學(xué)試劑Human Endostatin, ES Elisa Kit 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)彎曲桿菌的TTC試驗(yàn)英文名稱:Edetate Disodium200mg重組人 Pepsinogen C / PGC 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)促銷537-41-796T谷氨酸脫羧酶2(GAD2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%RH 42120mgZnT-84320-30-3高端化學(xué)試劑Human Endostatin, ES Elisa Kit
RH 42120mg 1016-05-3Rat intercellular adhesion molecule 3, ICAM-3 Elisa KitHPLC95%RH 42120mgZnT-8進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)彎曲桿菌的TTC試驗(yàn)英文名稱:Edetate Disodium200mg重組人 Pepsinogen C / PGC 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)促銷537-41-796T谷氨酸脫羧酶2(GAD2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%RH 42120mgZnT-84320-30-3高端化學(xué)試劑Human Endostatin, ES Elisa Kit 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定時(shí)防止菌落蔓延英文名稱:Saccharin Calcium100mg重組人 TGFBR1 / ALK-5 / SKR4 蛋白 (aa 200-503, His & GST 標(biāo)簽)1146113-27-096T谷氨酸脫羧酶2(GAD2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%MM 1-43 20mgRA33IgG Ab36589-29-4高端化學(xué)試劑Human ferritin, FE Elisa Kit
MM 1-43 20mg 101711-78-8Rat intercellular adhesion molecule 3, ICAM-3 Elisa KitHPLC95%MM 1-43 20mgRA33IgG Ab進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定時(shí)防止菌落蔓延英文名稱:Saccharin Calcium100mg重組人 TGFBR1 / ALK-5 / SKR4 蛋白 (aa 200-503, His & GST 標(biāo)簽)1146113-27-096T谷氨酸脫羧酶2(GAD2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%MM 1-43 20mgRA33IgG Ab36589-29-4高端化學(xué)試劑Human ferritin, FE Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于化妝品中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定英文名稱:2g重組人 Ubiquitin specific peptidase 30 / USP30 蛋白 (SUMO 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)56317-21-696T山梨醇脫氫酶(SDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%RH 414 20mgCasp-1036589-29-4高端化學(xué)試劑Human ferritin, FE Elisa Kit
RH 414 20mg 10177-29-4Rat plasminogen activator inhibitor 1, PAI-1 Elisa Kit HPLC95%RH 414 20mgCasp-10進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于化妝品中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定英文名稱:2g重組人 Ubiquitin specific peptidase 30 / USP30 蛋白 (SUMO 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)56317-21-696T山梨醇脫氫酶(SDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%RH 414 20mgCasp-1036589-29-4高端化學(xué)試劑Human ferritin, FE Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)化妝品微生物檢測(cè)英文名稱:Pramoxine Hydrochloride500mg重組人 RRM1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷90-19-796T氧還蛋白結(jié)合蛋白2(TBP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%MM 4-6420mgMMP-93230-94-2高端化學(xué)試劑Human microtransferrinuria, MTF Elisa Kit
MM 4-6420mg 10177-29-4Rat plasminogen activator inhibitor 1, PAI-1 Elisa Kit HPLC95%MM 4-6420mgMMP-9進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)化妝品微生物檢測(cè)英文名稱:Pramoxine Hydrochloride500mg重組人 RRM1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷90-19-796T氧還蛋白結(jié)合蛋白2(TBP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%MM 4-6420mgMMP-93230-94-2高端化學(xué)試劑Human microtransferrinuria, MTF Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)彎曲桿菌甘氨酸耐受性試驗(yàn)英文名稱:Sulfanilamide 5g重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)特價(jià)促銷76235-93-396T細(xì)胞色素P450家族成員7A1(CYP7A1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%MM 2-1020mgCA3230-94-2高端化學(xué)試劑Human microtransferrinuria, MTF Elisa Kit
MM 2-1020mg 101-86-0Rat plasminogen activator inhibitor, PAI Elisa Kit HPLC95%MM 2-1020mgCA進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)彎曲桿菌甘氨酸耐受性試驗(yàn)英文名稱:Sulfanilamide 5g重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)特價(jià)促銷76235-93-396T細(xì)胞色素P450家族成員7A1(CYP7A1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%MM 2-1020mgCA3230-94-2高端化學(xué)試劑Human microtransferrinuria, MTF Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)彎曲桿菌的化氫試驗(yàn)英文名稱:500mg重組人 PPIL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)517-66-896T血紅素結(jié)合蛋白(HPX)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%MM 5-9520mgSDS32443-99-5高端化學(xué)試劑Human tissue inhibitor of metal protease 1, TIMP-1 Elisa Kit
MM 5-9520mg 101-86-0Rat plasminogen activator inhibitor, PAI Elisa Kit HPLC95%MM 5-9520mgSDS進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)彎曲桿菌的化氫試驗(yàn)英文名稱:500mg重組人 PPIL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)517-66-896T血紅素結(jié)合蛋白(HPX)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%MM 5-9520mgSDS32443-99-5高端化學(xué)試劑Human tissue inhibitor of metal protease 1, TIMP-1 Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于細(xì)菌的DNA酶水解試驗(yàn)英文名稱:Clofibrate1g重組人 LILRB2 / ILT4 / LIR-2 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)41787-57-996T谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%TMA-DPH20mgAAN-A5 Ab32443-99-5高端化學(xué)試劑Human tissue inhibitor of metal protease 1, TIMP-1 Elisa Kit
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 兔黏液瘤病毒(RMV);核酸定量試劑盒;48T;FSP2913;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專門(mén)針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對(duì)各種動(dòng)物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚(yú))的科研試劑。
公司秉承“專注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),力求為我國(guó)科研事業(yè)更好的,更專業(yè)的服務(wù)!
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