PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：豬傳染性胃腸炎病毒定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱：詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
編號(hào)： FSP2798
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集：
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí)，吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm，發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
Human β-actin(Beta actin) ELISA KitHuman f-Hb(Free Haemoglobin) ELISA Kit1-己炔 細(xì)胞TNF ALPHA蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒
Human AA(Arachidonic Acid) ELISA KitHuman FLNα(Filamin A, Alpha) ELISA Kit1-己炔 TNF ALPHA蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒
Human MBP(myelin basic protein) ELISA KitHuman FLOT2(Flotillin 2) ELISA Kit氟化氫吡啶絡(luò)合物(Olah試劑)TNF ALPHA蛋白免疫共沉淀分析試劑盒
Human ACP(Acid phosphatase) ELISA KitHuman Flt3L(FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit氟化氫吡啶絡(luò)合物(Olah試劑)TNF ALPHA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒
Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) ELISA KitHuman FOXC1(Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit2-(1H-吡唑-3-基)吡啶 細(xì)胞TNF BETA蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒
Human CHAT(Choline O-acetyltransferase) ELISA KitHuman ITG αⅤβ3(Integrin αⅤβ3) ELISA Kit2-(1H-吡唑-3-基)吡啶載玻片細(xì)胞TNF BETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒
Human HbsAg(hepatitis B virus Surface Antigen) ELISA KitHuman FPB(Fibrinopeptide B) ELISA Kit3-羥基-2-吡啶甲酸冰凍切片組織TNF BETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒
Human IMPDH2(Inosine 5′-Monophosphate Dehydrogenase 2) ELISA KitHuman fPSA(Free Prostate Specific Antigen) ELISA Kit3-羥基-2-吡啶甲酸石蠟切片組織TNF BETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒
豬傳染性胃腸炎病毒定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)試劑Trem樣轉(zhuǎn)錄因子1檢測(cè)試劑盒100mg1184-16-3mouse follicle-stimulating hormone, FSH Elisa KitHPLC98%Trem樣轉(zhuǎn)錄因子1檢測(cè)試劑盒100mgHib-Ab200mgCAS號(hào)：柯達(dá)定影液60-92-4 2827-56-796T非神經(jīng)元性烯醇化酶(NNE)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Trem樣轉(zhuǎn)錄因子1檢測(cè)試劑盒100mgHib-Ab17784-47-3高端化學(xué)試劑細(xì)胞色素P450家族成員2B6(CYP2B6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)250mgCAS號(hào)：柯達(dá)顯影液60-92-4 288-88-096T肌肽(CAR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Traf2結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒100mgAnti-Mpo17784-47-3高端化學(xué)試劑錨定蛋白重復(fù)域蛋白1(ANKRD1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
標(biāo)準(zhǔn)品Traf2結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒100mg1184-16-3mouse follicle-stimulating hormone, FSH Elisa KitHPLC95%Traf2結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒100mgAnti-Mpo250mgCAS號(hào)：柯達(dá)顯影液60-92-4 288-88-096T肌肽(CAR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Traf2結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒100mgAnti-Mpo17784-47-3高端化學(xué)試劑錨定蛋白重復(fù)域蛋白1(ANKRD1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)200mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 50mL37839-81-9 385-00-296T防御素β2(DEFβ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll作用蛋白檢測(cè)試劑盒100mgRhoA8063-24-9高端化學(xué)試劑角蛋白18(KRT18)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
標(biāo)準(zhǔn)試劑Toll作用蛋白檢測(cè)試劑盒100mg85251-63-4Mouse cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen, CⅠCP Elisa KitHPLC98%Toll作用蛋白檢測(cè)試劑盒100mgRhoA200mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 50mL37839-81-9 385-00-296T防御素β2(DEFβ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll作用蛋白檢測(cè)試劑盒100mgRhoA8063-24-9高端化學(xué)試劑角蛋白18(KRT18)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)50mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 100mL37839-81-9 496-72-096T早期生長(zhǎng)應(yīng)答因子2(EGR2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)GC98%Toll樣受體9檢測(cè)試劑盒250mgSAαZGC8063-24-9高端化學(xué)試劑雌激素受體β(ERβ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Toll樣受體9檢測(cè)試劑盒250mg85251-63-4Mouse cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen, CⅠCP Elisa KitGC98%Toll樣受體9檢測(cè)試劑盒250mgSAαZGC50mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 100mL37839-81-9 496-72-096T早期生長(zhǎng)應(yīng)答因子2(EGR2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)GC98%Toll樣受體9檢測(cè)試劑盒250mgSAαZGC8063-24-9高端化學(xué)試劑雌激素受體β(ERβ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)200mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 250mL37839-81-9 506-38-796T脂氧素A4(LXA4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體7檢測(cè)試劑盒20mgBKV8063-24-9高端化學(xué)試劑5-羥色胺受體1A(HTR1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Toll樣受體7檢測(cè)試劑盒20mgMouse deoxypyridinoline, DPD Elisa KitHPLC98%Toll樣受體7檢測(cè)試劑盒20mgBKV200mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 250mL37839-81-9 506-38-796T脂氧素A4(LXA4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體7檢測(cè)試劑盒20mgBKV8063-24-9高端化學(xué)試劑5-羥色胺受體1A(HTR1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)150mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 500mL61-19-8 506-46-796T胰脂肪酶(PL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體6檢測(cè)試劑盒100mgBKV IgG Ab547-58-0高端化學(xué)試劑蕈堿型膽堿受體M3(CHRM3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Toll樣受體6檢測(cè)試劑盒100mgMouse deoxypyridinoline, DPD Elisa KitHPLC98%Toll樣受體6檢測(cè)試劑盒100mgBKV IgG Ab150mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 500mL61-19-8 506-46-796T胰脂肪酶(PL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體6檢測(cè)試劑盒100mgBKV IgG Ab547-58-0高端化學(xué)試劑蕈堿型膽堿受體M3(CHRM3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)125mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 1000mL61-19-8 506-48-996T胰淀粉酶α2(AMY2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體5檢測(cè)試劑盒20mgITG αⅤβ1547-58-0高端化學(xué)試劑糖蛋白A33(GPA33)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Toll樣受體5檢測(cè)試劑盒20mg1120-28-1Mouse pyridinium crosslink/PyriLinks, PY Elisa KitHPLC98%Toll樣受體5檢測(cè)試劑盒20mgITG αⅤβ1125mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 國(guó)產(chǎn) 1000mL61-19-8 506-48-996T胰淀粉酶α2(AMY2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體5檢測(cè)試劑盒20mgITG αⅤβ1547-58-0高端化學(xué)試劑糖蛋白A33(GPA33)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)10mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 進(jìn)口 25mL61-19-8 51-36-596T精氨酰氨基肽酶(RNPEP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體4檢測(cè)試劑盒20mgCyp7A1547-58-0高端化學(xué)試劑IL2誘導(dǎo)T細(xì)胞激酶(ITK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
標(biāo)準(zhǔn)品Toll樣受體4檢測(cè)試劑盒20mg1120-28-1Mouse pyridinium crosslink/PyriLinks, PY Elisa KitHPLC98%Toll樣受體4檢測(cè)試劑盒20mgCyp7A110mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 進(jìn)口 25mL61-19-8 51-36-596T精氨酰氨基肽酶(RNPEP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體4檢測(cè)試劑盒20mgCyp7A1547-58-0高端化學(xué)試劑IL2誘導(dǎo)T細(xì)胞激酶(ITK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)100mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 進(jìn)口 100mL61-19-8 5495-84-196T松弛素/胰島素樣肽受體1(RXFP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體3檢測(cè)試劑盒100mg27-Hycl8004-87-3高端化學(xué)試劑CD5抗原樣蛋白(CD5L)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Toll樣受體3檢測(cè)試劑盒100mg92517-02-7Mouse Osteopontin, OPN Elisa KitHPLC98%Toll樣受體3檢測(cè)試劑盒100mg27-Hycl100mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 進(jìn)口 100mL61-19-8 5495-84-196T松弛素/胰島素樣肽受體1(RXFP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體3檢測(cè)試劑盒100mg27-Hycl8004-87-3高端化學(xué)試劑CD5抗原樣蛋白(CD5L)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)20mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 進(jìn)口 250mL4578-31-8 551-92-896T抗神經(jīng)節(jié)苷脂M1抗體(Anti-GM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體2檢測(cè)試劑盒100mgITGα58004-87-3高端化學(xué)試劑神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Toll樣受體2檢測(cè)試劑盒100mg92517-02-7Mouse Osteopontin, OPN Elisa KitHPLC98%Toll樣受體2檢測(cè)試劑盒100mgITGα520mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 進(jìn)口 250mL4578-31-8 551-92-896T抗神經(jīng)節(jié)苷脂M1抗體(Anti-GM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Toll樣受體2檢測(cè)試劑盒100mgITGα58004-87-3高端化學(xué)試劑神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)20mgCAS號(hào)：藍(lán)蓋試劑瓶 進(jìn)口 500mL4578-31-8 55589-62-396T絲裂原激活蛋白激酶激活蛋白激酶2(MAPKAPK2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)97%Toll樣受體1檢測(cè)試劑盒100mgITGβ18004-87-3高端化學(xué)試劑維生素D結(jié)合蛋白(DBP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字： 豬傳染性胃腸炎病毒定量RT-;PCR檢測(cè)試劑盒;50T;FSP2798;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒，種屬標(biāo)本齊全,有專門針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒；另有針對(duì)各種動(dòng)物（鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚(yú)）的科研試劑。
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