PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱:芥末PCR試劑盒
英文名稱:詳見說明書
編號: FSP2542
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
Human LYN ELISA KitHuman VGF(Neurosecretory protein VGF) ELISA Kit2,6-二氟苯甲醛C8166
Human LYG1 ELISA KitHuman GPT(Alanine aminotransferase 1) ELISA Kit二氫楊梅素A3
Human LYPLA1 ELISA KitHuman FBLN5(Fibulin-5) ELISA Kit2,5-二氟吡啶HuT78
Human LYRM7 ELISA KitHuman MUC21(Mucin-21) ELISA Kit2,5-二氟吡啶TF-1
Human LYPLAL1 ELISA KitHuman NR1H2(Oxysterols receptor LXR-beta) ELISA KitD-別異亮氨酸CCRF-CEM
Human LUC7L ELISA KitHuman CAV1(Caveolin-1) ELISA KitD-別異亮氨酸THP-1
Human LSM5 ELISA KitHuman LIPF(Gastric triacylglycerol lipase) ELISA KitD-別異亮氨酸CEM/C1
Human LUC7L2 ELISA KitHuman CYP3A4(Cytochrome P450 3A4) ELISA Kit2,5-二溴-3-己基噻吩HL-60
芥末PCR試劑盒Staphylococcus sp.Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗人分泌型IgA 3-氯-4-氟苯甲醚禽流感病毒通用型熒光PCR檢測試劑盒
Glomerella cingulata (Stoneman) Spaulding e ..Rabbit Anti-human sIgA/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗人分泌型IgA Bovine adrenal medulla dodecapeptide新城疫病毒通用型實時熒光PCR檢測試劑盒
Homo sapiens, humanRabbit Anti-human sIgA/APC APC標記的兔抗人分泌型IgA 4-氟-3-硝基氯芐N末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)檢測試劑盒(干式免疫熒光法)
Hymenochaete cervina Berkeley et CurtisRabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗人分泌型IgA 2-甲氧基-3-氨基吡啶肌紅蛋白(Myo)檢測試劑盒(干式免疫熒光法)
Clostridium perfringens (Veillon and Zuber) ..Rabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗人分泌型IgA Regorafenib (BAY 73-4506)D-二聚體(D-dimer)檢測試劑盒(干式免疫熒光法)
Homo sapiens, human skin; derived from meta ..Rabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗人分泌型IgA [Arg8]-Vasotocin acetate salt降鈣素原(PCT)檢測試劑盒(干式免疫熒光法)
Mycobacterium engbaekii Korsak and BoisvertRabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗人分泌型IgA NVP-AUY922高敏C反應蛋白(hs-CRP)檢測試劑盒(干式免疫熒光法)
Gyoerffyella rotula (von Hohnel) MarvanovaRabbit Anti-human sIgA/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗人分泌型IgA 2-甲氧基-3-硝基吡啶保健品快速檢測箱
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關鍵字: 芥末;PCR試劑盒;50T;FSP2542;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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