PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：漢坦病毒Ⅰ型PCR試劑盒
英文名稱：詳見(jiàn)說(shuō)明書
編號(hào)： FSP2508
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集：
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí)，吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm，發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
兔主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞Human TNFRSF13B/TACI(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B) ELISA Kit利多卡因角膜成纖維細(xì)胞
兔子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Human TNFRSF13C/BAFFR(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C) ELISA Kit利多卡因角膜內(nèi)皮細(xì)胞
兔子宮平滑肌細(xì)胞Human TNFRSF14/HVEM(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14) ELISA Kit利多卡因成人表皮角化細(xì)胞
小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞Human TNFRSF4/OX40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4) ELISA Kit草酸二乙酯成人真皮成纖維細(xì)胞
小鼠B淋巴細(xì)胞Human TNFRSF5/CD40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5) ELISA Kit2,4-二氨基-6-苯基-1,3,5-三嗪表皮黑色素細(xì)胞
小鼠DC細(xì)胞Human TNFRSF9/4-1BB(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9) ELISA Kit2,4-二氨基-6-苯基-1,3,5-三嗪皮膚肥大細(xì)胞
小鼠DC細(xì)胞Human TNFSF11/RANKL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11) ELISA Kit直接紅80新生兒表皮角化細(xì)胞
小鼠NK細(xì)胞Human TNFSF13/APRIL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13) ELISA Kit3,3-二氨基聯(lián)苯胺 四鹽酸鹽新生兒真皮成纖維細(xì)胞
漢坦病毒Ⅰ型PCR試劑盒Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗親和素 Benidipine HCl豬鏈球菌抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
Homo sapiens, humanRabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗親和素 BEZ235雞新城疫病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Avidin/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗親和素 Veliparib豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）抗體（IgG）檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
Mycobacterium smegmatis (Trevisan) Lehmann ..Rabbit Anti-Avidin/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗親和素 LY2603618禽流感A型抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）（檢血清/血漿/蛋黃）
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Biotin/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG Arg-Gly-Asp-Ser犬瘟熱病毒抗原（CDV）快速檢測(cè)卡(檢眼結(jié)膜分泌物\鼻液\尿液\血清\血漿，)
frozen 1 mL per vialRabbit Anti-Biotin/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG (+)-Biotin-PEG6-OH犬狂犬病毒抗原檢測(cè)卡(檢唾液/血清,10條/盒)
Papulaspora pallidula HotsonRabbit Anti-Biotin/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG CGK 733豬瘟病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
Peltaster fructicola Johnson et al., anamor ..Rabbit Anti-Biotin/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG Corticotropin Releasing Factor sheep豬圓環(huán)病毒2型抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字： 漢坦病毒Ⅰ型;PCR試劑盒;50T;FSP2508;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒，種屬標(biāo)本齊全,有專門針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒；另有針對(duì)各種動(dòng)物（鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚(yú)）的科研試劑。
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