PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:納氏蟲屬通用·PCR定量試劑盒
英文名稱:Naegleria spp.·PCR
編號: FSP1959
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
H1N1 Hemagglutinin 1/HA probe甲型流感病毒血凝素抗體特價促銷anti- NEDD1 antibody2-丙烯酰氨基-2-甲基-1-丙烷磺酸丹皮酚
H2N2 Hemagglutinin甲型流感病毒血凝素抗體(H2N2)特價促銷anti- NEDD4 antibody2-氨基-6-甲氧基吡啶圣草酚
Histone H2A組蛋白H2A抗體特價促銷anti- NEDD4L antibody2-氨基-6-甲氧基吡啶大豆苷
Acetyl-Histone H2A(K5)乙?;M蛋白H2A抗體特價促銷anti- NEDD8 antibody4-氨基苯硼酸頻哪醇酯蒼術素
Histone H2A.x組蛋白H2AX抗體特價促銷anti- NEIL1 antibody4-氨基苯硼酸頻哪醇酯木香烴內(nèi)酯
Phospho-Histone H2A.X (Ser139)磷酸化組蛋白H2AX抗體特價促銷anti- NEIL3 antibody丙烯酰胺酸棗仁皂苷A
Phospho-Histone H2A.X (Tyr143)磷酸化組蛋白H2AX抗體特價促銷anti- NEK11 antibody丙烯酰胺酸棗仁皂苷B
Histone H2B組蛋白H2B抗體特價促銷anti- NEK2 antibody丙烯酰胺大葉茜草素
納氏蟲屬通用·PCR定量試劑盒C3 ELISA試劑盒CR1/CD35 Ⅰ型補體受體抗體(C3b/C4b受體抗體)二正己基壬,分子量:356Imidazoie 咪唑 Amresco
C4 ELISA試劑盒 DBC2 乳腺癌基因刪除蛋白2抗體二正己基壬,分子量:356甲基藍
Camel Beta-Endorphin,β-EP ELISA試劑盒FAT/CDHF7/FAT1 鈣粘蛋白家族成員7抗體二(2-乙基己基)壬二酸酯,分子量:413Amygdalin 扁桃苷
Camel Endothelin 1,ET-1 ELISA試劑盒 CD36/PAS-4 CD36抗體二(2-乙基己基)壬二酸酯,分子量:413NBT 氯化硝基四氮唑藍
Camel lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA試劑盒 GAS7/Growth Arrest Specific Protein 7 生長休止特定蛋白7抗體雙(2-羥乙基)聚酸二異丙酯NBT 氯化硝基四氮唑藍
Camel transforming growth factors β2,TGFβ2 ELISA試劑盒 EB3 微管相關蛋白EB家族3抗體雙(2-羥乙基)聚酸二異丙酯MTT 噻唑藍 Amresco
Cherax quadricarinatus lipovitellin/vitellin,Lv/Vn ELISA試劑盒 CD4 CD4抗體二壬二酸,分子量:216MTT 噻唑藍 Amresco
Chicken 1,3-βD glucosidase,1,3-βD-Glu ELISA試劑盒 CD4 CD4抗體二壬二酸,分子量:216MTT 噻唑藍 Amresco
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關鍵字: 納氏蟲屬通用·;PCR定量試劑盒;50T;FSP1959;
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