PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:馬皮疽組織胞漿菌PCR試劑盒
英文名稱:Histoplasm farcinimosumPCR
編號: FSP1757
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
phospho-RAD51(Thr310)磷酸化Rad51抗體特價促銷anti- Huntingtin antibody組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)總活性比色法定量檢測試劑盒線粒體鐵轉(zhuǎn)運蛋白2抗體
Phospho-RSK2(Ser369)磷酸化核糖體S6激酶RSK2抗體特價促銷anti- HuR antibody體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)總活性比色法定量檢測試劑盒鋅指轉(zhuǎn)錄蛋白Sall1抗體
C5a過敏毒素C5a(補體C5a)抗體特價促銷anti- HURP antibody細胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性熒光定量檢測試劑盒轉(zhuǎn)錄因子SOX17抗體
C3過敏毒素C3(補體C3)抗體特價促銷anti- HUS1 antibody組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性熒光定量檢測試劑盒分選連接蛋白5抗體
human C3補體C3抗體特價促銷anti- HUS1B antibody體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性熒光定量檢測試劑盒分選連接蛋白2抗體
C5b-9末端補體復(fù)合物抗體特價促銷anti- HUWE1 antibody細胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性比色法定量檢測試劑盒分選連接蛋白7抗體
CQ028多癌基因下調(diào)蛋白抗體特價促銷anti- HVCN1 antibody組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性比色法定量檢測試劑盒核轉(zhuǎn)錄因子抗體
CA125/MUC16卵巢癌抗原抗體特價促銷anti- HVEM/TNFRSF14 antibody體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性比色法定量檢測試劑盒離子轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白SLC7A9抗體
馬皮疽組織胞漿菌PCR試劑盒Luciferase Assay System, 10-PackIGSF12/CD300 免疫球蛋白超家族成員12抗體牙齦卟啉單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒Oxyresveratrol;氧化白藜蘆醇
Luciferase Assay System Luciferase Assay SystemIGSF16/CD300C 免疫球蛋白超家族成員16抗體卟啉單胞菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒Isovitexin;異牡荊素
Luciferase Assay Reagent(a,b,c)IGSF21 免疫球蛋白超家族成員21抗體中間普雷沃菌探針法熒光定量PCR試劑盒Apigenin-7-O-glucronide;芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷
GloResponse™ NFAT-RE-luc2P HEK293 Cell LineGDPD2/GDE3 促進成骨細胞分化因子抗體黑色普雷沃菌探針法熒光定量PCR試劑盒Astilbin;落新婦苷
GloResponse™ CRE-luc2P HEK293 Cell LineGDPD3 甘油磷酸二酯酶磷酸結(jié)構(gòu)域3抗體普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒Carbamazepine;卡馬西平
pGL4.30GDPD5 甘油磷酸二酯酶磷酸結(jié)構(gòu)域5抗體痤瘡丙酸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒8-Methoxypsoralen;花椒毒素
pGL4.29CSPP1 中心體和紡錘體極相關(guān)蛋白1抗體丙酸桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒Amygdalin;苦杏仁苷
pGL4.28ZPI/SERPINA10 絲氨酸蛋白酶抑制劑A10抗體巨睪前殖吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒Di-tert-octyl-Disulfide;氯化天竺葵素
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 馬皮疽組織胞漿菌;PCR試劑盒;50T;FSP1757;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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