PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱:蓋塔病毒PCR試劑盒
英文名稱:Getah virus(GETV)RTPCRPCR
編號: FSP1696
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
CHL1/CALL神經細胞粘附分子CALL抗體特價促銷anti- GPR58/TAAR2 antibody血液結構型內皮細胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性熒光定量檢測試劑盒前列腺腫瘤高表達蛋白1抗體
COL6A5/Collagen VI alpha 56型膠原蛋白α5抗體特價促銷anti- GPR81 antibody體液結構型內皮細胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性熒光定量檢測試劑盒嘌呤ATP受體抗體
CPA6胰羧肽酶A6抗體特價促銷anti- GPR83 antibody細胞黃嘌呤氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒蛋白磷酸酶γ1抗體
GJC2/Connexin 47間隙連接蛋白47抗體特價促銷anti- GPRASP1-Specific antibody組織黃嘌呤氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒核苷酸還原酶M2B抗體
Sin3b轉錄抑制蛋白Sin3b抗體特價促銷anti- GPRASP2 antibody體液黃嘌呤氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒磷酸二酯酶4A抗體
HAPLN2透明質酸及粘蛋白2抗體特價促銷anti- GPRC5A/RAI3 antibody細胞黃嘌呤氧化酶活性熒光定量檢測試劑盒一種腫瘤抑制基因抗體(C端)
HAS3透明質酸合成酶3抗體特價促銷anti- GPRIN1 antibody組織黃嘌呤氧化酶活性熒光定量檢測試劑盒Patched/PTCH抗體
KAL1卡爾曼綜合征基因1抗體特價促銷anti- GPRIN3-Specific antibody體液黃嘌呤氧化酶活性熒光定量檢測試劑盒Pan ras抗體
蓋塔病毒PCR試劑盒Prostaglandin (PG) E1 前列腺素E1Ube2L3 泛素蛋白連接酶L3抗體鯉皰疹病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒硝酸纖維素膜(NC膜0.22um)
Prostaglandin (PG) D2 前列腺素D2Ube2N/UBC13 泛素蛋白連接酶2N抗體鵪鶉奇異線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒PCR八連排管(平),只有管 八聯(lián)排管 0.2ml PCR8聯(lián)排管,透明, 125 排/盒,10盒/箱
Prostaglandin (PG) B2 前列腺素B2UBE2E3 泛素蛋白連接酶E3抗體豬囊尾蚴探針法熒光定量PCR試劑盒PCR八連排管帶蓋(鼓),一套都有 八聯(lián)排管 0.2ml無色凸蓋PCR8聯(lián)排管(含蓋),125 排/盒,10盒/箱
Prostaglandin (PG) A1 前列腺素A1UBE2E2 泛素蛋白連接酶2E2抗體巨細胞病毒探針法熒光定量PCR試劑盒PCR八連排管帶蓋(平),一套都有 八聯(lián)排管 0.2ml,PCR8聯(lián)排管,帶平蓋,無色,125排/盒,10盒/箱
20×MOPS-SDS Running Buffer 20×MOPS-SDS電泳緩沖液UBE2D4 泛素蛋白連接酶D4抗體質型多角體病毒探針法熒光定量PCR試劑盒PCR管(離心管) 0.2ml透明平蓋PCR薄壁管,1000/盒,10盒/箱
Deoxyribonuclease I (DNase I) from bovine pancreas 脫氧核糖核酸酶I,來源于牛胰腺UBE2D3 泛素蛋白連接酶D3抗體指環(huán)蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒PCR管(離心管) 0.2ml PCR 薄壁管(圓蓋)無色,1000支/盒;10盒/箱
Papain from papaya Latex,≥15 units/mg protein 木瓜蛋白酶,來源于木瓜乳液UBE2D1 泛素蛋白連接酶D1抗體節(jié)片代凡絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒PCR管(離心管) 0.5ml 無色PCR平蓋薄壁管,1000個/盒,10盒/箱
Surface RNase Remover (with Spray Bottle) 固相RNase清除劑(含噴霧瓶)UBE2C 泛素蛋白連接酶C抗體布魯塞爾德克酵母探針法熒光定量PCR試劑盒PCR八連排蓋(平),只有蓋子 ,熒光定量 0.2ml透明PCR八排管蓋(熒光定量專用),125 排/盒,10盒/箱
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關鍵字: 蓋塔病毒;PCR試劑盒;50T;FSP1696;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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