PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:匙形古柏線蟲PCR試劑盒
英文名稱:Cooperia punctataPCR
編號: FSP1516
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
GIMAP7GTP酶IMAP家族成員7抗體特價促銷anti- Cytokeratin 18 antibody人體P14基因甲基化檢測試劑盒膜相關(guān)環(huán)指蛋白6抗體
GIMAP8GTP酶IMAP家族成員8抗體特價促銷anti- Cytokeratin 19 antibody人體SNCG基因甲基化檢測試劑盒單氨氧化酶A抗體
GPRIN1G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白1抗體特價促銷anti- Cytokeratin 19 antibody人體RASSF1A基因甲基化檢測試劑盒同源盒蛋白Meis1抗體
GPRIN2G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白2抗體特價促銷anti- Cytokeratin 19 antibody小鼠αACTIN基因甲基化檢測試劑盒絲裂原活化蛋白激酶組織蛋白1抗體
GPRIN3G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白3抗體特價促銷anti- Cytokeratin 19-specific antibody大鼠αACTIN基因甲基化檢測試劑盒G蛋白偶聯(lián)受體24抗體
DIRC2干擾腎細(xì)胞癌蛋白2抗體特價促銷anti- Cytokeratin 1-specific antibody小鼠PDGFβ基因甲基化檢測試劑盒絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體
p400p400蛋白抗體特價促銷anti- Cytokeratin 20 antibody大鼠PDGFβ基因甲基化檢測試劑盒突變的黑色素瘤相關(guān)抗原1抗體
DNAJC7DNAJC7蛋白抗體特價促銷anti- Cytokeratin 20 antibody人體IL-17基因甲基化檢測試劑盒黑色素瘤相關(guān)抗原10抗體
匙形古柏線蟲PCR試劑盒Human PPP1CB ELISA KitPAGE1 前列腺相關(guān)P抗原家族成員1抗體三溴甲烷3%NaCl精氨酸雙水解酶
Human PPM1G ELISA KitPAI1/PLANH1/Serpine 1 內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活抑制蛋白1抗體叔丁基 2,2,2-三氯乙酰亞胺酯3%NaCl賴氨酸脫羧酶
Human PPID ELISA KitNMT1 豆蔻?;D(zhuǎn)移酶1抗體叔丁基 2,2,2-三氯乙酰亞胺酯3%NaCl鳥氨酸脫羧酶
Human POU3F3 ELISA KitGPR171/Platelet Activating Receptor H963 G蛋白偶聯(lián)受體171抗體1-叔丁氧羰基-4-哌啶乙酸MR-VP
Human POLR3A ELISA KitPOT1 端粒保護蛋白1抗體1-叔丁氧羰基-4-哌啶乙酸1%NaCl甘露醇
Human POLR3D ELISA KitPRSS3 腦胰蛋白酶3抗體1-叔丁氧羰基-4-哌啶乙酸OF
Human POLR3B ELISA KitHDBP2/PTTG1IP 乳頭瘤病毒調(diào)控因子1抗體(鋅指蛋白395)三(4-三氟甲苯基)膦1%NaCl乳糖
Human POU3F4 ELISA KitPCANAP2/Prostein 前列腺癌相關(guān)蛋白2抗體三(4-三氟甲苯基)膦ONPG
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 匙形古柏線蟲;PCR試劑盒;50T;FSP1516;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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