別名: AKT;CWS6;PKB:PKB-ALPHA:PRKBARACRAC-ALPHA
應(yīng)用: WB IHCIF
稀釋比例: WB 1500-2000. IHC 1:50-100. IF 1:50-100.
蛋白分子量: 56kDa
Gene ID: 207
保存: Store at -20°C. Avoid freeze 1 thaw cycles.
儲(chǔ)存液: Bufr. PBS with 0.02% sodium azide, 50% glycerol, pH73.
純化方法Afnity purification
亞型: IgG
免疫原: A synthetic peptide of human AKT1
性狀:液體
Public Immunogen Range: A syntthetic peptide of human AKT1
Subellular Locations: Cell membrane Cytoplasm Nucleus
Swiss Prot: P31749
克隆類型: Polyclonal Antibody
注意事項(xiàng):
1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。
2、雖然作用溫和，但能硬化組織,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆，切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過24小時(shí)。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意 有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴-次性手套操作
操作步驟:
根據(jù)使用量,取每1mL RIPA加入10uL PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM?；靹騻溆?PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加)
1、樣品前處理:
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗-遍。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接蟲。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。
c)對(duì)于組織樣品:把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品1000-14000g 離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
溫馨提示:
工作液與濃縮液選擇的技巧，以及各自的優(yōu)勢(shì)。
1,工作液的優(yōu)勢(shì):工作液操作方便，降低實(shí)驗(yàn)操作步驟，對(duì)于要求無菌的實(shí)驗(yàn)，降低染菌風(fēng)
金。
2,濃縮液的優(yōu)勢(shì):濃縮液成本相對(duì)較低，實(shí)驗(yàn)范圍更廣，對(duì)于不要求無菌的實(shí)驗(yàn)，可以進(jìn)行多種濃度的實(shí)驗(yàn)分析以及比較。而且由于濃度高,保存更加穩(wěn)定。