十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)在蛋白表達(dá)分析等科研工作中經(jīng)常用到。可用于獲取蛋白質(zhì)樣品的電泳圖譜,結(jié)合其它基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)鑒定服務(wù)對(duì)樣品進(jìn)行分析或純化,用于復(fù)雜生物樣品的蛋白質(zhì)譜分析。 百泰派克生物科技可根據(jù)您的需求,提供基于1D SDS-PAGE或2D SDS-PAGE的蛋白分離服務(wù):基于我司優(yōu)化的標(biāo)準(zhǔn)操作流程,使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝膠系統(tǒng)進(jìn)行1D SDS-PAGE蛋白質(zhì)分離。將蛋白樣品(5-20ug)用上樣緩沖液稀釋到一定濃度并加熱(沸水浴5 min),根據(jù)樣品的分析目的選擇適當(dāng)濃度的凝膠并將樣品上樣到凝膠孔中,加入電泳緩沖液,首先在80V電壓下恒壓分離15min,然后在120V電壓下恒壓分離60 min。分離后卸下膠板,將凝膠用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染染色。 2D SDS-PAGE蛋白分離使用IPG(pH 3-10)膠進(jìn)行一維等電點(diǎn)聚焦,SDS-PAGE膠二維電泳進(jìn)行Mw分離,實(shí)現(xiàn)蛋白分離。樣品首先使用超濾管進(jìn)行純化,并將溶液體系替換為2D lysis buffer (30 mM Tris- HCl, pH 8.8, containing 7 M urea, 2 M thiourea and 4% CHAPS)進(jìn)行等電點(diǎn)聚焦。聚焦好的膠條膠面朝上放在干的厚濾紙上,擠去多余水分、礦物油及多余樣品,用緩沖液溶脹15 min后,將膠條繼續(xù)在平衡緩沖液中平衡15 min。將膠條膠面朝上放在凝膠的長(zhǎng)玻璃板上,使用低熔點(diǎn)瓊脂糖封膠后,將凝膠轉(zhuǎn)移至電泳槽中,起始使用低電壓,待樣品在完全走出IPG膠條,濃縮成一條線后,加大電壓,待溴酚藍(lán)指示劑達(dá)到底部邊緣時(shí)即可停止電泳。卸下膠板,將凝膠用考馬斯亮藍(lán)染色、銀染染色或熒光染色。使用Typhoon TRIO (GE Healthcare)對(duì)膠圖進(jìn)行掃描,掃描得到的膠圖通過(guò)Image Quant software (version 6.0, GE Healthcare)和DeCyder 5.0 (GE Healthcare)進(jìn)行分析。
1. 液體或固體樣品均可。 2. 1D SDS-PAGE一般需要2-30µg蛋白,2D SDS-PAGE一般需要50-1000µg蛋白。 3. 考馬斯亮藍(lán)染色、銀染染色或熒光染色的蛋白質(zhì)均可。
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