"A20細胞:小鼠B細胞淋巴瘤細胞系
細胞背景資料:淋巴瘤;BALB/cAnN
細胞形態(tài):淋巴母細胞樣
細胞生長:懸浮
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
細胞生長特性:懸浮
細胞培養(yǎng)實驗基本操作:①進無菌室前要徹底洗手,按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。②操作者動作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長時間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì),吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長,以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,危害培養(yǎng)細胞,同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶,開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位,避免直立,以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口,培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。④操作時盡量不要談話,咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時,應(yīng)專管專用,一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去,以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面,用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面;防止細胞交叉污染:所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備,一旦懷疑發(fā)生交叉污染,可做細胞遺傳學(xué)方面的鑒定,如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變,可以復(fù)蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系的傳代工作應(yīng)由兩人獨立進行;無菌室的徹底消毒①新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室。使用前應(yīng)稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比,的優(yōu)點是便宜,而且可以稀釋50倍用,而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。②甲醛熏蒸法:甲醛是一種廣譜滅菌劑菌,其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉,熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。
絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性。如果和標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)不一致,那可能是自己沒消化好導(dǎo)致的,但如果消化方法正確,仍然成片分布,甚至完全吹打成單細胞懸液,貼壁后仍然成片分布,這是細胞的特性,是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布,你的細胞之后會對你越來越不好。
如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同,還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應(yīng)該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應(yīng)該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。2.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預(yù)吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復(fù)多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意,結(jié)合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。3.關(guān)于培養(yǎng)瓶內(nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對于生長速度快的細胞,易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。4.關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會比一次性相對好一些。而對于同一種細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比內(nèi)好。這可能是因為比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候,會好一點,比如剛剛復(fù)蘇的時候,或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。
Ly1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Intestinal Porcine Epithelial細胞:-1細胞、Sp2/0細胞、NCIH847細胞
MDA-MB-435細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H28細胞、3T3 L1細胞、HEK 293FT細胞
LAPC-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSA Dx5細胞、COR-L51細胞、B95.8細胞
G422細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKGT2細胞、B16F1細胞、H-2170細胞
Leghorn Male Hepatoma細胞:細胞系相關(guān)產(chǎn)品:2V6.11細胞、P-19細胞、COR-L 105細胞
MNNG/HOS Clone F-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJSA1細胞、DHL-16細胞、GM02131A細胞
RT-BM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL6細胞、H-740細胞、OKAC1細胞
MNNG-HOS (Cl#5)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P31-FUJ細胞、HCGC細胞、Hi-5細胞
MC-38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OE-21細胞、SUDHL8細胞、HeLa S3細胞
RL95-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Clone 166細胞、GM03570細胞、Molm 13細胞
MLTC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MV3細胞、HemECs細胞、SK N SH細胞
HEK293T/17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNSH細胞、University of Arizona Cell Culture-893細胞、SUM149PT細胞
DoHH2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMRCRCZ細胞、KYSE 180細胞、H-2291細胞
MT-3 [Human leukocytes]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PAMC82細胞、Hs 729T細胞、RPMI 8226/S細胞
MESSA-DX5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLC-15細胞、PLA801D細胞、OCI-AML2細胞
H4IIEC3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Virginia Mason Research Center-Lung Cancer D細胞、MM1-S細胞、HCC2108細胞
G 292 Clone A 141B1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:T-HEECs細胞、COV504細胞、X63-AG 8.653細胞
MCF12A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EST50細胞、NCI-SNU-C2B細胞、GC-2細胞
UCLA NPA871細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MADB106細胞、A2780 CP70細胞、MDAMB361細胞
KMS-18細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MALME.3M細胞、TCam 2細胞、HH [Human lymphoma]細胞
CORL51細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1299細胞、CF Pac1細胞、Hs746-T細胞
LICCF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Emory University-3細胞、DB細胞、EJ1細胞
LS180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW982細胞、MDA-MB453細胞、Hs 294T細胞
CEM.C1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:10RGB細胞、NCIH23細胞、MN-9D細胞
NRK49F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SN4741細胞、GM04678細胞、3T3-L1 ad細胞
NCI-H3255細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CATH-a細胞、C8166-CD4細胞、H-196細胞
MGC803細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2780-CP細胞、SK-GT-4細胞、CEM細胞
MPVECs細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM 239A細胞、PL-9細胞、Hs819.T細胞
HCa/16A3-F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHEP1細胞、CCK-81細胞、RA.1細胞
SF-539 BT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCL1細胞、Liver-02細胞、RMC細胞
GM0637細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM149細胞、TOV112D細胞、Leukemic 1210細胞
RKO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM451Lu細胞、SKML-28細胞、HSC(Human Schwann)細胞
SW-1573細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDBK (NBL-1)細胞、IM 9細胞、NR 8383細胞
NFS-60細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-600-T細胞、MeSoTheliOma-211H細胞、293 H細胞
HEMCSS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:STTG1細胞、SKCO 1細胞、RL95細胞
LADMAC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TO175T細胞、MRC 5細胞、FHCRC subclone 11細胞
Y-79細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MBT2細胞、DITNC1細胞、CX-1細胞
P31FUJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL-16細胞、ME1細胞、FU-OV-1細胞
HMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-CCRF (CAMR)細胞、624 MEL細胞、GM2132細胞
COLO-HSR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H.Ep. #2細胞、HOC1細胞、rRTEC細胞
WM115mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc203細胞、HTori-3.1細胞、UCLA RO-81A-1細胞
RGC5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa.S3細胞、L- cell細胞、SW839細胞
HRPEpiC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HDQ-P1細胞、RSC-364細胞、QBI-HEK 293A細胞
WEHI 164 TC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs683T細胞、OVCA 432細胞、MARC 145細胞
H-735細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P30/Ohkubo細胞、LS 1034細胞、IPAM-WT細胞
NPA'87細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lewis-Lung細胞、HBZY1細胞、87 MG細胞
686LN-M4e細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-2細胞、Dx5細胞、786-O RCC細胞
PIGI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GTL 16細胞、HS-683細胞、Y3細胞
NCIH889細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS180細胞、SK-HEP-1細胞、FHL 124細胞
PSN1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SVEC4-10細胞、TOV21G細胞、DiFi細胞
ECV-304細胞系相關(guān)產(chǎn)品:National Medical Center-Glioma 1細胞、F56 [Human neoplasm]細胞、SDBMSC細胞
MHCC-LM3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-28I2細胞、JROECL19細胞、Hs934T細胞
WPE-int細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-2108細胞、DMS-53細胞、BIC細胞
MV522細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC-28細胞、MCF-10A細胞、JROECL 33細胞
MCF-10 Attached細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH929細胞、E6-1細胞、RL952細胞
MiaPaca.2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGHU1細胞、L-428細胞、MDA-MB-330細胞
GT38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOG細胞、CoCL3細胞、Mv 1 Lu細胞
HSC 3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P1-Raji細胞、YES2細胞、SNU368細胞
GM-346細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVHM細胞、KM H-2細胞、NBLS細胞
Calu-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-378細胞、OP-9細胞、Hs 611.T細胞
NCIH2405細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-865細胞、SHG 44細胞、143TK-細胞
Central Adrenergic TH-expressing a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPC-11細胞、H-128細胞、LAPC4細胞
BIC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1048細胞、TR 146細胞、AHH-1細胞
NIH/3T3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAPC2B細胞、MDA-MB 468細胞、MX-1細胞
COV434細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SRS-82細胞、NWA細胞、FL83B細胞
HEK-A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTPA細胞、VAESBJ細胞、NCIH747細胞
Tohoku Hospital Pediatrics-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2107細胞、NCI-H1581細胞、NFS-60細胞
Hs 766T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HRVEC細胞、MDA MB 436細胞、WM-266-4細胞
MOLT 3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-009細胞、OAW-42細胞、LA-4 [Mouse lung adenoma]細胞
TE7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1417細胞、CPA 47細胞、UM-UC-14細胞
Hs281T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBdSMC細胞、N1S1細胞、CALU1細胞
GM-637細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BL1339細胞、PL9細胞、SK HEP-1細胞
LAPC-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSA Dx5細胞、8305C細胞、JHH-2細胞
SW-1783細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMM-1細胞、BALB/3T3細胞、Natural Killer-92細胞
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