"REC-1細(xì)胞:人淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:懸浮 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:3—1:6傳代,2-3天換液1次 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作:①進(jìn)無菌室前要徹底洗手,按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。②操作者動作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長時間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì),吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長,以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,危害培養(yǎng)細(xì)胞,同時塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶,開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位,避免直立,以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口,培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。④操作時盡量不要談話,咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時,應(yīng)專管專用,一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去,以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面,用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面;防止細(xì)胞交叉污染:所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲備,一旦懷疑發(fā)生交叉污染,可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定,如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變,可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。重要細(xì)胞系的傳代工作應(yīng)由兩人獨(dú)立進(jìn)行;無菌室的徹底消毒①新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室。使用前應(yīng)稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比,的優(yōu)點(diǎn)是便宜,而且可以稀釋50倍用,而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。②甲醛熏蒸法:甲醛是一種廣譜滅菌劑菌,其水溶液和氣體對各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉,熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。 凍存和復(fù)蘇的原則:慢凍快融》當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下變化:細(xì)胞器脫水,細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細(xì)胞逐步脫水,細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會造成細(xì)胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。慢凍程序》1.標(biāo)準(zhǔn)程序:采用細(xì)胞凍存器》當(dāng)溫度在-25℃以上時,1~2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時,5~10℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-100℃時,可迅速放入液氮中。2.簡易程序:將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內(nèi),紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2℃的速度,在40min內(nèi)降至液氮表面過夜,次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序:冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。細(xì)胞凍存方法:1.預(yù)先配制凍存液》(1)8%DMSO+細(xì)胞生長液(92%血清)2.取對數(shù)生長期細(xì)胞,經(jīng)胰酶消化后,加入適量凍存液,用吸管吹打制成細(xì)胞懸液(1×10(6)~5×10(6)細(xì)胞/ml)。3.加入1ml細(xì)胞于凍存管中,密封后標(biāo)記冷凍細(xì)胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細(xì)胞的復(fù)蘇方法:1.快速解凍》凍存細(xì)胞從液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在1分鐘內(nèi)全部融化(不要超過3分鐘)。2.解凍后的細(xì)胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng),24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液,以去除DMSO。3.如果細(xì)胞對冷凍保護(hù)劑特別敏感解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑,然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。 細(xì)胞的凍存:目前,細(xì)胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。主要操作步驟為:(1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×10(6)~1×10(7)/mL之間。(3)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤?,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時,再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時,再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時,最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。 L-5178-Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Clone 929細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-330細(xì)胞、GM03569D細(xì)胞 HRA 19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細(xì)胞、NCI-H2444細(xì)胞、L02細(xì)胞 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