"AML-193細胞:人急性單核細胞白血病單核細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞生長:懸浮 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2傳代。3天內(nèi)可長滿。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞培養(yǎng)無菌操作的演示:凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面;靠近酒精燈火焰操作。器皿使用前必須過火滅菌,繼續(xù)使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處,使用時仍要過火。各種操作要靠近酒精燈,動作要輕、準確,不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管,防止交叉污染。玻璃器械洗消:一、新的玻璃器皿的洗消:自來水刷洗,除去灰塵。烘干、泡:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀中12小時以除去臟物、鉛、等物。刷洗、烘干:12小時后立即用自來水沖洗,再用洗滌劑刷洗,自來水沖干凈后用烤箱烘干;泡酸、清洗:用清潔液浸泡12小時,然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次,最后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。烘干、包裝:洗干凈后先烘干,然后用牛皮紙(油光紙)包裝。高壓消毒:包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子,打開開關(guān)和安全閥,當蒸氣成直線上升時,關(guān)閉安全閥,當指針指向15磅時,維持20-30分鐘。高壓消毒后烘干。二、舊的玻璃器皿的洗消:刷洗、烘干:使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中,泡過來蘇爾溶液(洗滌劑)的器皿要用清水刷洗干凈,然后烘干。泡酸、清洗:烘干后泡入清潔液(酸液),12小時后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來水沖洗(避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗),再用蒸餾水沖洗3次。烘干、包裝:洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙(油光紙)等包裝。 絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性。如果和標準形態(tài)不一致,那可能是自己沒消化好導致的,但如果消化方法正確,仍然成片分布,甚至完全吹打成單細胞懸液,貼壁后仍然成片分布,這是細胞的特性,是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布,你的細胞之后會對你越來越不好。 細胞消化過程總結(jié):其實絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性,無論死活的細胞都是如此,你可以嘗試,準備100%的單個細胞懸液,貼壁后觀察細胞,仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液(不要笑,這個是初養(yǎng)懸浮細胞的人常犯的錯誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開)。細胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個時候即使是成片的(比如Calu-3細胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個細胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間,或者像有的同學那樣吹打1h,等待單細胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞,一般不超過5min,即可見細胞成片移動,就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候,比如tsDC細胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。 RPMI8226/S細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFL-1細胞、SMA-560細胞、BEL7404細胞 OVCA8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03320細胞、RCC-10細胞、hA549細胞 NSH細胞系相關(guān)產(chǎn)品:THC-8307細胞、LA-N-6細胞、HEK 293 EBNA細胞 SU-DHL6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuT78細胞、NCI-H661細胞、IOSE-29細胞 SK-MEL-2-LUC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VE細胞、CORL105細胞、B16-F10細胞 HOC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC 25細胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細胞、H-2023細胞 IPAM-WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mink細胞、Hs 822.T細胞、BEND細胞 CCK-81細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H6c7細胞、MA-c細胞、Mouse Colon 38細胞 HT115細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML-5細胞、SNU5細胞、SKMEL3細胞 NCIH2452細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-3細胞、NMCG1細胞、HPMEC細胞 FLC-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 F10細胞、B95-8細胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-1細胞 H-2052細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM149-PT細胞、SCL II細胞、Hs 863.T細胞 COLO394細胞系相關(guān)產(chǎn)品:373 MG細胞、BE2-M17細胞、RGM1細胞 UT7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MEG01細胞、TE-671細胞、T/GHA-VSMC細胞 Jiyoye細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ABC-1細胞、LNCaP C4-2細胞、3AO細胞 LIM1215細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC44細胞、HL60細胞、MDAMB468細胞 LIM1215細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC44細胞、HL60細胞、MDAMB468細胞 HEK293-F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-X63Ag8.653細胞、SKG3A細胞、B4G12細胞 GLC-82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C2C12細胞、NCI-H292細胞、1E8-H細胞 KG1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE2M17細胞、U-87MG ATCC細胞、Hs 766T細胞 MCF-12A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LSC-1細胞、SKHEP-1細胞、EB-2細胞 H1105細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP 126細胞、SW579細胞、D-324MED細胞 16-HBE14o細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SN12-PM6細胞、HEC1-B細胞、P-388D1細胞 SUM-190細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1355細胞、FL62891細胞、Oka-C1細胞 NCI-BL1339細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Neuro-2a細胞、Tb 1-Lu細胞、NCTC1469細胞 L-M[TK-]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRTL 5細胞、H2286細胞、C57 Mouse Tumor 93細胞 COV-434細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1376細胞、PNT-1A細胞、B16BL6細胞 U251細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Lung Microvascular Endothelial細胞:-5a細胞、H-2444細胞、B16-F10-BL6細胞 Z-138細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H838細胞、LNCaP-FGC細胞、D283 Med細胞 GM00637H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A101D細胞、SUDHL16細胞、IM-95細胞 IOSE-29細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-a-2細胞、SNU-C2B細胞、MAntle cell VERona-1細胞 MGH-U1 (EJ)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lewis lung carcinoma line 1細胞、HBL-100細胞、H1436細胞 Huh 7.5.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM(TK-)細胞、SuDHL 2細胞、UM2細胞 AN3 CA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BV-2細胞、Ishikawa細胞、COLO 679細胞 SKM1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:QBC-939細胞、KBM-5細胞、NCIH647細胞 T98 G細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colon38細胞、MMQ細胞、32D.cl3細胞 BT474細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-727細胞、McA-RH8994細胞、MS-751細胞 WC00079細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A549ATCC細胞、MKN74細胞、D 407細胞 H1975細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM0637細胞、Spodoptera frugiperda clone 9細胞、Human Epidermoid carcinoma #2細胞 GM02219細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMY1022細胞、KP-2細胞、MDA 231-LM2-4175細胞 FRTL-5 Cl 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63Ag8.653細胞、HUCEC細胞、MCF-7/AdrR細胞 B 95-8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL-4細胞、HR8348細胞、OCI-Ly 8細胞 MDA-MB-468細胞系相關(guān)產(chǎn)品:V79-4細胞、H82細胞、Ra No. 1細胞 NCI-H2066細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_08_13細胞、Hs606T細胞、3T3細胞 SVOG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-1-P細胞、HCC94細胞、B10BR細胞 SKBr3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-281-T細胞、HFTF細胞、OAW 42細胞 P31/FUJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNUC2A細胞、NFS-60細胞、MIA-Pa-Ca-2細胞 H1975細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM0637細胞、Spodoptera frugiperda clone 9細胞、Human Epidermoid carcinoma #2細胞 Hi-five細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTh-74細胞、CAL851細胞、NCIH211細胞 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