"CCD-33Co細胞:人結腸成纖維細胞系 細胞背景資料:詳見相關文獻介紹 細胞形態(tài):成纖維細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分 細胞培養(yǎng)無菌操作的演示:凡是帶入超凈工作臺內的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面;靠近酒精燈火焰操作。器皿使用前必須過火滅菌,繼續(xù)使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處,使用時仍要過火。各種操作要靠近酒精燈,動作要輕、準確,不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管,防止交叉污染。玻璃器械洗消:一、新的玻璃器皿的洗消:自來水刷洗,除去灰塵。烘干、泡:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀中12小時以除去臟物、鉛、等物。刷洗、烘干:12小時后立即用自來水沖洗,再用洗滌劑刷洗,自來水沖干凈后用烤箱烘干;泡酸、清洗:用清潔液浸泡12小時,然后從酸缸內撈出器皿用自來水沖洗15次,最后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。烘干、包裝:洗干凈后先烘干,然后用牛皮紙(油光紙)包裝。高壓消毒:包裝好的器皿裝入高壓鍋內蓋好蓋子,打開開關和安全閥,當蒸氣成直線上升時,關閉安全閥,當指針指向15磅時,維持20-30分鐘。高壓消毒后烘干。二、舊的玻璃器皿的洗消:刷洗、烘干:使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中,泡過來蘇爾溶液(洗滌劑)的器皿要用清水刷洗干凈,然后烘干。泡酸、清洗:烘干后泡入清潔液(酸液),12小時后從酸缸內撈出器皿立即用自來水沖洗(避免蛋白質干涸后粘附于玻璃上難以清洗),再用蒸餾水沖洗3次。烘干、包裝:洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙(油光紙)等包裝。 絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性。如果和標準形態(tài)不一致,那可能是自己沒消化好導致的,但如果消化方法正確,仍然成片分布,甚至完全吹打成單細胞懸液,貼壁后仍然成片分布,這是細胞的特性,是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布,你的細胞之后會對你越來越不好。 細胞培養(yǎng)過程中相關問題總結:懸浮性細胞應如何繼代處理?一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應為多少轉速?欲回收動物細胞,其離心速率一般為300xg(約1,000rpm),5-10分鐘,過高之轉速,將造成細胞死亡;細胞之接種密度為何?依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因;細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何?動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意:由于DMSO稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成;DMSO之等級和無菌過濾之方式為何?冷凍保存使用之DMSO等級,必須為Tissue culture grade之DMSO,其本身即為無菌狀況,次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于4°C,避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質,并可減少污染之機會。若要過濾DMSO,則須使用耐DMSO之Nylon材質濾膜;冷凍保存細胞之方法?冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C 30~60分鐘→ (-20°C 30分鐘)→-80°C 16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20°C不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些;細胞欲冷凍保存時,細胞冷凍管內應有多少細胞濃度?冷凍管內細胞數(shù)目一般為1x10(6)cells/ml vial,融合瘤細胞則以5x10(6)cells/ml vial為宜;應如何避免細胞污染?細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法;如果細胞發(fā)生微生物污染時,應如何處理?直接滅菌后丟棄之。 SK-CO-1細胞系相關產(chǎn)品:H-1734細胞、NCI-H1437細胞、CV 1細胞 NCIH69細胞系相關產(chǎn)品:RD 2細胞、H-1963細胞、ASPC1細胞 32D:cl3細胞系相關產(chǎn)品:Farage OL細胞、LS174細胞、HepG2/C3A細胞 MDCK-2細胞系相關產(chǎn)品:Ku812F細胞、HS578T細胞、Swiss/3T3細胞 SCL1細胞系相關產(chǎn)品:NCTC clone 1469細胞、HTR-8細胞、RWPE1細胞 H920細胞系相關產(chǎn)品:HG2855細胞、SPCA-1細胞、MA-c細胞 MTEC1細胞系相關產(chǎn)品:HCC-1833細胞、Vero 76 clone E6細胞、HS-294細胞 NCI-H2135細胞系相關產(chǎn)品:DV90細胞、TGBC11T細胞、ISHI細胞 Human Embryo Lung-1細胞系相關產(chǎn)品:H-1437細胞、SKNBE(1)細胞、TKB-1細胞 KG-1a細胞系相關產(chǎn)品:HVSMC細胞、ROS17/28細胞、QG-56細胞 GT39細胞系相關產(chǎn)品:NCI.H460細胞、RPMI8226細胞、HCC1588細胞 T. T細胞系相關產(chǎn)品:Experimental Mammary Tumour-6細胞、FDC-P1細胞、HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]細胞 MC3T3-E1 Subclone 24細胞系相關產(chǎn)品:H1666_DA細胞、526mel細胞、Lung cancer-1/squamous細胞 Hela-Ap-1細胞系相關產(chǎn)品:LC-2/ad細胞、HSKMC細胞、MKN1細胞 Panc203細胞系相關產(chǎn)品:SCH細胞、HCASMC細胞、Human podocyte細胞 NALM-6-M1細胞系相關產(chǎn)品:HCC-15細胞、KRCY細胞、LAD 2細胞 NT-2細胞系相關產(chǎn)品:CATH.a細胞、CT 26細胞、3T3-L1細胞 801-D細胞系相關產(chǎn)品:IPEC1細胞、Panc02細胞、PANC0813細胞 SHEP1細胞系相關產(chǎn)品:SKRC-39細胞、Panc-08.13細胞、Hs940T細胞 Panc4.03細胞系相關產(chǎn)品:RMG-1細胞、EB2細胞、Melanoma 14細胞 P30-OHK細胞系相關產(chǎn)品:MDA468細胞、KU812-F細胞、H441細胞 3AO細胞系相關產(chǎn)品:TH1細胞、H711細胞、RN細胞 1301細胞系相關產(chǎn)品:L細胞:細胞、CoCL2細胞、PSN-1細胞 SAS細胞系相關產(chǎn)品:GA-10-Clone-4細胞、NPA細胞、H-650細胞 Panc_05_04細胞系相關產(chǎn)品:JIMT1細胞、H2172細胞、McARH7777細胞 MCF 7B細胞系相關產(chǎn)品:J-111細胞、CCD 1112SK細胞、Hep 2細胞 CCC-HIE-2細胞系相關產(chǎn)品:HEK293EBNA細胞、293 H細胞、Gejiu Lung Carcinoma-82細胞 SNU-5細胞系相關產(chǎn)品:SKLU01細胞、HCT_116細胞、KYSE-50細胞 HIT T-15細胞系相關產(chǎn)品:CORL23細胞、SGC 7901細胞、SK RC 20細胞 TSUpr1細胞系相關產(chǎn)品:SNU761細胞、UCLA NPA871細胞、KG1細胞 RPMI 8226細胞系相關產(chǎn)品:LLC1細胞、A204細胞、Intestinal Epithelioid細胞: No. 18細胞 H1385細胞系相關產(chǎn)品:MM.1S細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII細胞、HeLa229細胞 SV40-HCEC細胞系相關產(chǎn)品:IOSE-Mar細胞、Capan 2細胞、Nthy ori 3.1細胞 CWR22R細胞系相關產(chǎn)品:EAhy926細胞、A72細胞、SK_N_BE2C細胞 FF-WT-BJ細胞系相關產(chǎn)品:hTERT-HPNE細胞、R 2 C細胞、H-4細胞 CAL33細胞系相關產(chǎn)品:RPMI-1846細胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-1細胞、F-81細胞 H-2452細胞系相關產(chǎn)品:S-16細胞、hOMF細胞、BCaP 37細胞 Karpas 422細胞系相關產(chǎn)品:WC00059細胞、NS-1細胞、TC7細胞 SK BR 03細胞系相關產(chǎn)品:3T3NIH細胞、KTC1細胞、Hs 739.T細胞 RSC-364細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H-128細胞、KMBC細胞、MES-SA細胞 A 2058細胞系相關產(chǎn)品:SK-N-BE2C細胞、G-292, clone A141B1細胞、LS 174 T細胞 C8D1A細胞系相關產(chǎn)品:NCIH1930細胞、HELA-GFP細胞、Dunn LM8細胞 ZR75-30細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H1522細胞、SCC VII細胞、HEC1-B細胞 RPVSMC細胞系相關產(chǎn)品:SUM-149細胞、NCI-H1651細胞、NCIH1975細胞 WEHI 3B細胞系相關產(chǎn)品:Tca-8113細胞、4T1.2細胞、Nb2-11細胞 NCC-IT細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2198細胞、MGHU1細胞、SUP-T1細胞 HCC1395細胞系相關產(chǎn)品:COLO-829細胞、3T6細胞、Human Fetal Thymocyte-8810細胞 HTR-8/SVneo細胞系相關產(chǎn)品:DV-90細胞、hCMEC/D3細胞、PC-12細胞 HIT-T15細胞系相關產(chǎn)品:SMA560細胞、H747細胞、SNU886細胞 LC-2 ad細胞系相關產(chǎn)品:C17.2細胞、IMR-32細胞、SMA 560細胞 DMS 273細胞系相關產(chǎn)品:AN-3細胞、OCI-Ly7細胞、Hs940-T細胞 DBTRG-05MG細胞系相關產(chǎn)品:EBTr細胞、HB611細胞、NCI-SNU-216細胞 HSC6細胞系相關產(chǎn)品:HOP 92細胞、Dami細胞、SNU620細胞 Madin-Darby Bovine Kidney細胞系相關產(chǎn)品:C3H/10T1/2細胞、WM 239-A細胞、U-266 AR1細胞 JURKAT E-61細胞系相關產(chǎn)品:MT-4細胞、WM-2664細胞、HNEpC細胞 GM03320細胞系相關產(chǎn)品:SK.OV.3細胞、675T細胞、L-02細胞 293A細胞系相關產(chǎn)品:WC00044細胞、A-2058細胞、4175細胞 BCP-1細胞系相關產(chǎn)品:P3X63Ag8-6-5-3細胞、High-5細胞、H-810細胞 EB-2細胞系相關產(chǎn)品:Rainbow Trout Embryo細胞、U251n細胞、CHO-S細胞 MOLP2細胞系相關產(chǎn)品:MDA231細胞、Panc2.03細胞、PTK1細胞 KYSE-150細胞系相關產(chǎn)品:BJA-B細胞、74Int細胞、Ly1細胞 RPMI 2650細胞系相關產(chǎn)品:JIMT細胞、HuLEC-5a細胞、H-735細胞 P3-Jiyoye細胞系相關產(chǎn)品:M-NFS-60細胞、SHZ-88細胞、SK-RC-39細胞 Henrietta Lacks cells細胞系相關產(chǎn)品:IM 9細胞、OVHM細胞、MOLT16細胞 RCC-10細胞系相關產(chǎn)品:SKCO-1細胞、OCI-Ly 18細胞、NCIH1355細胞 NL20細胞系相關產(chǎn)品:RIN m5F細胞、MLFC細胞、LTEP-sm 1細胞 LO2細胞系相關產(chǎn)品:IOSE 29細胞、NR 8383細胞、Hs 695T細胞 P3X63Ag8-6-5-3細胞系相關產(chǎn)品:SUM102PT細胞、RINm5F細胞、RT112細胞 Virginia Mason Research Center-Lung Cancer D細胞系相關產(chǎn)品:H211細胞、CLL-CII細胞、bEnd.3[BEND3]細胞 TK+/- (clone 3.7.2C)細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2106細胞、130 T細胞、PLC-8024細胞 Hi-five細胞系相關產(chǎn)品:HTh-74細胞、CBRH-7919細胞、H4-II-E細胞 PL9細胞系相關產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-78細胞、OV1/P細胞、DHL8細胞 32D:cl3細胞系相關產(chǎn)品:Farage OL細胞、NOMO-1細胞、Fetal Bovine Heart Endothelial細胞 Leghorn Male Hepatoma細胞:細胞系相關產(chǎn)品:OVCAR433細胞、TE 32.T細胞、H-865細胞 "
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