"HCEC-B4G12細胞：人角膜內皮細胞系
細胞背景資料：角膜；內皮細胞；SV４０轉化；女性
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁
為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代？體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度；讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補加谷酷肢或生長因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內用完;分離培養(yǎng)物，檢測支原體。冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細胞轉移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。
細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結構，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣高壓消毒)，２mL安瓿(或專用細胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或專用冷凍塑料管中，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內;置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，最后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。
細胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享：支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在０.３-０.５um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞，也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長，營養(yǎng)要求比細菌高。細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到６３%，支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達，又不能通過可視法對其進行檢測，而且它對細胞的生長率影響較小，不易引起注意。國內外研究表明，９５%以上是以下四種支原體：口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii)，為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。組織細胞培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作；細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結構特征是沒有細胞壁，一般來講，對作用于細胞壁生物合成的抗生素，如萬古霉素等完全不敏感；對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。
LC-1/sq細胞系相關產(chǎn)品：Panc 10.05細胞、Scott細胞、EC-GI細胞
ARH77細胞系相關產(chǎn)品：H-9細胞、SNU407細胞、P19細胞
NCI-H2591細胞系相關產(chǎn)品：AML 12細胞、MC38細胞、Tu 212細胞
R.K.13細胞系相關產(chǎn)品：MDA-MB-134-VI細胞、Microbiological Associates-104細胞、OCI AML5細胞
LM-TK-細胞系相關產(chǎn)品：RPTC細胞、ID8細胞、GC-2spd(ts)細胞
SuDHL 1細胞系相關產(chǎn)品：HSKMC細胞、BE2M17細胞、NCIH3255細胞
MBT-2細胞系相關產(chǎn)品：HEY-A8細胞、HT-1376細胞、EC109細胞
Panc3_27細胞系相關產(chǎn)品：PG13細胞、Hs 746.T細胞、SVG p12細胞
MKN7細胞系相關產(chǎn)品：Panc 1細胞、HS-445細胞、WM266mel細胞
Ca761細胞系相關產(chǎn)品：NCIH2170細胞、ST細胞、PTK 1細胞
Panc4.03細胞系相關產(chǎn)品：RMG-1細胞、EB2細胞、Melanoma 14細胞
Embryonic Bovine Tracheal cells細胞系相關產(chǎn)品：NCM460細胞、HNE2細胞、DMS 153細胞
U-87-MG細胞系相關產(chǎn)品：MFHL-2細胞、A375細胞、T98 G細胞
ARPE19細胞系相關產(chǎn)品：Balb/3T3-4-Cl31細胞、U 937細胞、IM 9細胞
NCIH1568細胞系相關產(chǎn)品：THEECs細胞、118 MG細胞、RPMC細胞
IPEC-1細胞系相關產(chǎn)品：P3 (Jiyoye)細胞、CCRF/CEM/0細胞、SKNO1細胞
HH [Human lymphoma]細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1184細胞、H-1882細胞、C2A細胞
SF126細胞系相關產(chǎn)品：KMH-2細胞、MCA 205細胞、MKN 7細胞
SW 527細胞系相關產(chǎn)品：UMUC-3細胞、H1435細胞、A375-S2細胞
HS0578T細胞系相關產(chǎn)品：L cells (TK-)細胞、TK 10細胞、MGc80-3細胞
H1435細胞系相關產(chǎn)品：Panc5.04細胞、NCIH1395細胞、190PT細胞
LIM 1215細胞系相關產(chǎn)品：U-87細胞、DF1細胞、H1573細胞
NS20-Y細胞系相關產(chǎn)品：F442-A細胞、HeLa229細胞、FM-88細胞
Karpas422細胞系相關產(chǎn)品：CAL 12細胞、Hepa 1-6細胞、W133細胞
EOC 20細胞系相關產(chǎn)品：SK-N-BE(1)n細胞、HRMC細胞、CORL23細胞
FLS細胞系相關產(chǎn)品：Hs68細胞、PC10細胞、SNU484細胞
NCI-H2073細胞系相關產(chǎn)品：Gerner 7666細胞、HS-68細胞、B35細胞
CCRF CEM細胞系相關產(chǎn)品：ARO81-1細胞、MKN 7細胞、2PK-3細胞
C57 Mouse Tumor 93細胞系相關產(chǎn)品：Ramos(RA1)細胞、HeLa-229細胞、Sf21細胞
CAL-33細胞系相關產(chǎn)品：COLO 678細胞、WM451細胞、hTERT-HPNE細胞
Murine Leydig Tumor細胞：-1細胞系相關產(chǎn)品：GH3細胞、DrG細胞、Hs 819.T細胞
C1498細胞系相關產(chǎn)品：EB-3細胞、BJA-B1細胞、Mono Mac 1細胞
COLO 824細胞系相關產(chǎn)品：KY-270細胞、NP-69細胞、HEK293-EBNA細胞
HCC9724細胞系相關產(chǎn)品：BIU87細胞、MRAEC細胞、T-47D細胞
VeroC1008細胞系相關產(chǎn)品：Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細胞、CEMO-1細胞、EST81細胞
HCC0038細胞系相關產(chǎn)品：U-373MG細胞、Hs688(A)T細胞、J-774細胞
TE 671細胞系相關產(chǎn)品：SCC15細胞、RT4細胞、SACCLM細胞
HCC-95細胞系相關產(chǎn)品：Kit-225細胞、HDQ-P1細胞、DMS-273細胞
SKNDZ細胞系相關產(chǎn)品：751-NA-15細胞、HCC366細胞、PFSK-1細胞
Rat 1細胞系相關產(chǎn)品：HMrSV5細胞、NCI-H1792細胞、ACT-1細胞
Gingival carcinoma Neck Metastasis細胞系相關產(chǎn)品：NIH/3T3細胞、BV-173細胞、HEK/293細胞
COLO680N細胞系相關產(chǎn)品：CCC-HSF-1細胞、SNU182細胞、LS411N細胞
OCI-Ly 8細胞系相關產(chǎn)品：K562/ADP細胞、MOLT3細胞、MDA-MB-436細胞
HEH2細胞系相關產(chǎn)品：Walker/LLC-WRC256細胞、SNU119細胞、Huh-7.5細胞
CAL 12T細胞系相關產(chǎn)品：HOS-TE85細胞、SW-1990細胞、MES-SA/Dx-5細胞
C4-I細胞系相關產(chǎn)品：BpRc1細胞、D-341 Med細胞、Hs 888.Lu細胞
KOSC-2細胞系相關產(chǎn)品：OAW42細胞、Mel-MeWo細胞、T-ALL-1細胞
CDC/EU.HMEC-1細胞系相關產(chǎn)品：NCIH2227細胞、SKN-SH細胞、NCI-H209細胞
A7r5細胞系相關產(chǎn)品：SKCol1細胞、HuH6細胞、NCI-H64細胞
HLF-a細胞系相關產(chǎn)品：TW01細胞、MDAMB330細胞、COLO.205細胞
NCIH1395細胞系相關產(chǎn)品：C2-C12細胞、MH-S細胞、BJAB-1細胞
LM(TK-)細胞系相關產(chǎn)品：HCC0015細胞、373 MG細胞、B/C3T3細胞
TE-11細胞系相關產(chǎn)品：HuPT4細胞、COV434細胞、RPMI6666細胞
H-2228細胞系相關產(chǎn)品：VB細胞、KE-39細胞、KP-N-RT-BM細胞
U251-MG細胞系相關產(chǎn)品：Leukemia L1210細胞、DMS-153細胞、CCD33Co細胞
KYSE 70細胞系相關產(chǎn)品：REC細胞、Pt-K1細胞、Kit225-K6細胞
SK-MEL28細胞系相關產(chǎn)品：Hs 606.T細胞、Hs863T細胞、FRTL-5 Cl 2細胞
MOLT 3細胞系相關產(chǎn)品：BC-009細胞、OAW-42細胞、LA-4 [Mouse lung adenoma]細胞
Ramos 2G6.4C10細胞系相關產(chǎn)品：NSI/1-Ag4-1細胞、Hx147細胞、no.11細胞
SW-837細胞系相關產(chǎn)品：P3HR-1細胞、WM451Lu細胞、TCam-2細胞
NCI H157細胞系相關產(chǎn)品：Hs-606-T細胞、HPAF/CD18細胞、KGN細胞
D-283細胞系相關產(chǎn)品：NP69細胞、NCIH2023細胞、Vero-E6細胞
SUM149細胞系相關產(chǎn)品：KBM7細胞、PA317細胞、SP-2/0-AG14細胞
NCIH2122細胞系相關產(chǎn)品：LN-382細胞、OVTOKO細胞、NCIH1581細胞
H2122細胞系相關產(chǎn)品：HTR-8/SV-neo細胞、H2023細胞、RMa-bm細胞
Hs-606-T細胞系相關產(chǎn)品：SKES1細胞、NCIH1838細胞、LP-1細胞
Nb2-11細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H2444細胞、L-363細胞、MFE 280細胞
SK-N-FI細胞系相關產(chǎn)品：Tb 1 Lu細胞、P3/X63/Ag8細胞、MCF 10A細胞
Hs 895 T細胞系相關產(chǎn)品：CP-70細胞、THP-1細胞、MLTC-1細胞
CAL-33細胞系相關產(chǎn)品：COLO 678細胞、WM451細胞、hTERT-HPNE細胞
MES-SA-Dx5細胞系相關產(chǎn)品：CAL-39細胞、MCA-38細胞、WC00097細胞
NCI-1155細胞系相關產(chǎn)品：GM05372細胞、MDA157細胞、COS7細胞
NCI-H2591細胞系相關產(chǎn)品：AML 12細胞、TK-10細胞、K-562細胞
NCI-446細胞系相關產(chǎn)品：Rat Glomerular Endothelial細胞、Scott and White No. 13細胞、H-1672細胞
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