抗體制備過(guò)程:
1.材料與試劑
a.提取的動(dòng)物 Ig
b.弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。
4、試取血樣進(jìn)行測(cè)試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實(shí)驗(yàn)活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無(wú)菌采制)
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
(石蠟切片需做抗原修復(fù))
英文名稱 Anti-BRWD3
中文名稱 智力發(fā)育調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白BRWD3抗體
別 名 BRODL; Bromo domain containing protein disrupted in leukemia; Bromodomain and WD repeat domain containing 3; Novel WD repeat domain protein; BRWD3_HUMAN.
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來(lái)源 Rabbit
克隆類(lèi)型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep
產(chǎn)品類(lèi)型 一抗
研究領(lǐng)域 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期蛋白
蛋白分子量 predicted molecular weight: 203kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human BRWD3
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
抗體的制備過(guò)程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無(wú)載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過(guò)濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見(jiàn)。
下列是智力發(fā)育調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白BRWD3抗體 的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品:
紅平紅球菌現(xiàn)貨,ATCC菌株
放射性根瘤菌培養(yǎng),ATCC菌株
施氏假單胞菌保存,ATCC菌株
枯草芽孢桿菌售價(jià),ATCC菌株
褐球固氮菌現(xiàn)貨,ATCC菌株
巨大芽孢桿菌培養(yǎng),ATCC菌株
假結(jié)核耶爾森氏菌保存,ATCC菌株
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌售價(jià),ATCC菌株
FK506結(jié)合蛋白5(FKBP5)ELISA Kit for FK506 Binding Protein 5 (FKBP5)規(guī)格:48T/96T
密封蛋白(OCLN)ELISA Kit for Occludin (OCLN)規(guī)格:48T/96T
膽堿酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)ELISA Kit for Choline Acetyltransferase (ChAT)規(guī)格:48T/96T
生長(zhǎng)停滯DNA損傷可誘導(dǎo)蛋白α(GADD45α)ELISA Kit for Growth Arrest And DNA Damage Inducible Protein Alpha (GADD45a)規(guī)格:48T/96T
白介素18受體輔助蛋白(IL18RAP)ELISA Kit for Interleukin 18 Receptor Accessory Protein (IL18RAP)規(guī)格:48T/96T
刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)ELISA Kit for Hedgehog Interacting Protein (HHIP)規(guī)格:48T/96T
蛋白二化物異構(gòu)酶A2(PDIA2)ELISA Kit for Protein Disulfide Isomerase A2 (PDIA2)規(guī)格:48T/96T
無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員1(WNT1)ELISA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 1 (WNT1)規(guī)格:48T/96T
骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)ELISA Kit for Troponin I Type 2, Fast Skeletal (TNNI2)規(guī)格:48T/96T
神經(jīng)軟骨蛋白(NCDN)ELISA Kit for Neurochondrin (NCDN)規(guī)格:48T/96T
幾質(zhì)酶1(CHIT1)ELISA Kit for Chitinase 1 (CHIT1)規(guī)格:48T/96T
可溶性胸苷激酶1(TK1)ELISA Kit for Thymidine Kinase 1, Soluble (TK1)規(guī)格:48T/96T
蛋白激酶A錨定蛋白95抗體Vicenin-3中文名:別名:6-C-Glucosyl-8-C-xylosylapigenin分子式:C26H28O14
Apollon凋亡抑制蛋白抗體Scutellarein中文名:燈盞乙素苷元?jiǎng)e名:野黃芩素分子式:C15H10O6
α-連環(huán)蛋白抗體(鈣粘蛋白相關(guān)蛋白)Catenin αOroxin B中文名:木蝴蝶苷B別名:Baicalein 7-O-diglucoside分子式:C27H30O15
自噬相關(guān)蛋白9B抗體Vitexin 2''-O-(4'''-O-acetyl)rhamnoside中文名:別名:分子式:C29H32O15
自噬相關(guān)蛋白12抗體6-Methyl-8-prenylnaringenin中文名:別名:分子式:C21H22O5
智力發(fā)育調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白BRWD3抗體 Mortierella sp.種屬:Mortierella sp.
提供形式:斜面培養(yǎng)物
安全等級(jí):1
模式菌株:no
應(yīng)用領(lǐng)域::食用。
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基:綜合PDA瓊脂:馬鈴薯提取液 1.0L,葡萄糖 20.0g,KH2PO4 3.0g,MgSO4.7H2O 1.5g,維生素B1 微量,瓊脂 15.0g,pH6.0。[注] 馬鈴薯提取液:取去皮馬鈴薯200g,切成小塊,加水1.0L煮沸30min,濾去馬鈴薯塊,將濾液補(bǔ)足至1.0L。
傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無(wú)菌水或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無(wú)菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。
生長(zhǎng)條件:25℃,好氧
生長(zhǎng)特性8天長(zhǎng)滿斜面,菌絲潔白、濃密、整齊。
存儲(chǔ)條件:2-8℃冷藏,凍干管10年以上,斜面1-3個(gè)月。被孢霉屬(斜面)