抗體反應(yīng)的因素:
1.電解質(zhì) :抗原抗體特異結(jié)合后,膠體粒便可發(fā)生脫水作用,此時(shí)易受電解質(zhì)影響,如有適當(dāng)濃度的電解質(zhì)存在就會(huì)使它們失去部分負(fù)電荷而相互凝聚,于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。
2.酸堿度:合適的pH為6-8。
3.溫度:37℃通常是抗原體反應(yīng)最適溫度。
蛋白激酶B2 別 名 C AKT; MGC9965; Oncogene AKT1; PKB; PRKBA; Protein Kinase B Alpha; RAC Alpha; RAC; RAC PK Alpha; RAC Serine/Threonine Protein Kinase; vAKT Murine Thymoma Viral Oncogene Homolog 1.
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來(lái)源 Rabbit
克隆類(lèi)型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat
產(chǎn)品類(lèi)型 一抗
英文名稱(chēng) Anti-AKT2
中文名稱(chēng) 蛋白激酶B2
研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 激酶和磷酸酶
蛋白分子量 predicted molecular weight: 56kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human AKT2 C-terminus
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1:100-500 IF=1:100-500
(石蠟切片需做抗原修復(fù))
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水
2、蒸餾水沖洗,pbs 浸泡5 分鐘(如需采用抗原修復(fù),在此步驟后進(jìn)行)。
3、3%雙氧水去離子水(無(wú)色液體)孵育15-20 分鐘,以消除內(nèi)源性過(guò)氧物酶活性。
4、滴加試劑A(藍(lán)色液體)室溫孵育15-20 分鐘,傾去,勿洗。
5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2-3 小時(shí)或4℃過(guò)夜。
6、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
7、滴加試劑B(黃色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
9、滴加試劑C(橙色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
11、顯色劑顯色(DAB 或AEC)
12、自來(lái)水充分沖洗。
13、如果需要,可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。
14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>
抗體的鑒定:
1)抗體的效價(jià)鑒定:不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較高效價(jià)。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。
2)抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力??贵w的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時(shí)的濃度,并按公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí),表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
3)抗體親和力:是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(cè)鏈相反電荷基因的庫(kù)侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol??贵w親和力的測(cè)定對(duì)抗體的篩選,確定抗體的用途,驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
抗體反應(yīng)特點(diǎn):
1.高度特異性,特異性是抗原抗體反應(yīng)的最主要特征,特定抗原決定簇只與特定抗體結(jié)合;
2.可逆性:抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡, 其反應(yīng)式為:Ag+AbAg·Ab;
3.適當(dāng)濃度和比例;
4.敏感性:在測(cè)定血清中某一物質(zhì)的含量時(shí),化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應(yīng)測(cè)定法的敏感度約為5~10μg/ml,免疫測(cè)定中凝膠擴(kuò)散法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。
含試劑:
1、一抗(應(yīng)用:IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 )
2、無(wú)色試劑:內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑
3、試劑A:封閉用正常山羊血清工作液
4、試劑B:生物素標(biāo)記二抗工作液:生物素標(biāo)記羊抗兔IgG
5、試劑C:辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液
6、顯色液D液 (棕色) 1ml
7、顯色液E液(白色)20ml
解淀粉芽孢桿菌現(xiàn)貨,ATCC菌株
戊糖片球菌培養(yǎng),ATCC菌株
木醋桿菌保存,ATCC菌株
菊糖芽孢乳桿菌售價(jià),ATCC菌株
Lysinibacillusxylanilyticus現(xiàn)貨,ATCC菌株
Naxibactervarians培養(yǎng),ATCC菌株
空腸彎曲桿菌保存,ATCC菌株
干酪乳桿菌售價(jià),ATCC菌株
轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(TNPO2)ELISA Kit for Transportin 2 (TNPO2)規(guī)格:48T/96T
強(qiáng)啡肽原(PDYN)ELISA Kit for Prodynorphin (PDYN)規(guī)格:48T/96T
糜蛋白酶原B2(CTRB2)ELISA Kit for Chymotrypsinogen B2 (CTRB2)規(guī)格:48T/96T
Gasdermin B蛋白(GSDMB)ELISA Kit for Gasdermin B (GSDMB)規(guī)格:48T/96T
羧肽酶A5(CPA5)ELISA Kit for Carboxypeptidase A5 (CPA5)規(guī)格:48T/96T
集鈣蛋白2(CASQ2)ELISA Kit for Calsequestrin 2 (CASQ2)規(guī)格:48T/96T
甘肽受體4(GALR4)ELISA Kit for Galanin Receptor 4 (GALR4)規(guī)格:48T/96T
原鈣黏素β10(PCDHβ10)ELISA Kit for Protocadherin Beta 10 (PCDHb10)規(guī)格:48T/96T
輸入蛋白7(IPO7)ELISA Kit for Importin 7 (IPO7)規(guī)格:48T/96T
抑絲蛋白3(PFN3)ELISA Kit for Profilin 3 (PFN3)規(guī)格:48T/96T
泛激酶4(PANK4)ELISA Kit for Pantothenate Kinase 4 (PANK4)規(guī)格:48T/96T
突觸融合蛋白10(STX10)ELISA Kit for Syntaxin 10 (STX10)規(guī)格:48T/96T
血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體Paniculidine C中文名:別名:N-Demethoxypaniculidine B分子式:C13H17NO
拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體11-Hydroxycodaphniphylline中文名:別名:分子式:C30H47NO4
α-1抗胰糜蛋白酶抗體Paniculidine B中文名:別名:分子式:C14H19NO2
α-1抗胰蛋白酶抗體Indole-3-acrylic acid methyl ester中文名:別名:分子式:C12H11NO2
ATP結(jié)合蛋白家族6抗體Isorauhimbine中文名:別名:3-Epi-α-yohimbine分子式:C21H26N2O3
蛋白激酶B2 Rhizopus│tonkinensis種屬:Rhizopus│tonkinensis
提供形式:斜面培養(yǎng)物
安全等級(jí):1
模式菌株:no
應(yīng)用領(lǐng)域:產(chǎn)糖化酶。
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基:CM0014
生長(zhǎng)條件:28℃
存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法東京根霉