"MIA PaCa-2細胞：人胰腺導管癌細胞系
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２傳代；
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁生長
傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細胞培養(yǎng)成功以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液；２)向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶內(nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞；６)用計數(shù)板計數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；７)細胞培養(yǎng)換液時間應根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般２～３d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液?！咀⒁馐马棥浚?掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；２)掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。
在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養(yǎng)過程中生長不好、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不好》可能原因：細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未完全分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養(yǎng)基或血清：1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；2)選擇的培養(yǎng)基是否合適；3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤；培養(yǎng)環(huán)境：1)CO2供應是否正常；2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；2)避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養(yǎng)基，經(jīng)過驗證；4)注意實驗室的環(huán)境；二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因：1)培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；2)培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養(yǎng)液滲透壓不正確；5)培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積；解決方法：1)檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；2)檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養(yǎng)液滲透壓；5)換入新鮮培養(yǎng)液。
常規(guī)的細胞實驗(增殖，凋亡，遷移，分化之類的)，受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話(難消化細胞例外)。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細胞代數(shù)，對細胞狀態(tài)要求極高。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細胞包裝能力就會逐漸下降(當然也有其它因素影響包裝效率)。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性，來使得細胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間(如果１０min還消化不徹底的話)，而應該想其它辦法；PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學問可以講，對于一些難消化細胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制trypsin的活性。但對于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細胞，不需要配制如此溶液。
IPECJ2細胞系相關產(chǎn)品：EOC-20細胞、CAL-12T細胞、Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma細胞
Hs832.Tc細胞系相關產(chǎn)品：Vero 76細胞、MDAMB231細胞、NCI-A549細胞
L5178Y細胞系相關產(chǎn)品：Transformed Human Liver Epithelial-3細胞、J774.A1細胞、PL-5細胞
C42細胞系相關產(chǎn)品：LUDLU-1細胞、1E8-H細胞、PLA 802細胞
NIH:OVCAR-5細胞系相關產(chǎn)品：Ca9-22細胞、HCT-GEO細胞、Hs870T細胞
WM-266-4細胞系相關產(chǎn)品：CCD-966SK細胞、T-HSC細胞、MCF-7/ADR-RES細胞
LS411細胞系相關產(chǎn)品：H-2195細胞、NCI-H1668細胞、HCC1954細胞
WM-451Lu細胞系相關產(chǎn)品：MD Anderson-Metastatic Breast-453細胞、H-1666細胞、LN-18細胞
C1498細胞系相關產(chǎn)品：EB-3細胞、BJA-B1細胞、Mono Mac 1細胞
NCIH716細胞系相關產(chǎn)品：GM03573A細胞、3D4/21細胞、AMJ2C8細胞
Kit225-K6細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H358細胞、Okayama University Medical School-27細胞、HeLa.S3細胞
HEK 293FT細胞系相關產(chǎn)品：CBRH7919細胞、HBE細胞、IAR 20細胞
University of Arizona Cell Culture-893細胞系相關產(chǎn)品：GM2132細胞、SKBr3細胞、Sp2/O細胞
MPP-89細胞系相關產(chǎn)品：Adeno-293細胞、COLO 738細胞、IBRS2細胞
PF382細胞系相關產(chǎn)品：FRTL-5 Cl 2細胞、RWPE1細胞、PC 61 5.3細胞
SU86-86細胞系相關產(chǎn)品：H-4細胞、S3 HeLa細胞、UPCI:SCC090細胞
SU86-86細胞系相關產(chǎn)品：H-4細胞、S3 HeLa細胞、UPCI:SCC090細胞
TE-12細胞系相關產(chǎn)品：SKNBE細胞、U2-OS細胞、SuDHL 1細胞
IFRS1細胞系相關產(chǎn)品：SNU-423細胞、GM06141細胞、TE13細胞
RC92A細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1648細胞、CCC-HEH-2細胞、HUT 125細胞
TK+/- (clone 3.7.2C)細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H2106細胞、130 T細胞、PLC-8024細胞
Mouse Forestomach Carcinoma細胞系相關產(chǎn)品：MCA 205細胞、GM00346B細胞、Capan-1細胞
GC-1細胞系相關產(chǎn)品：Normal Rat Kidney-52E細胞、Hs 695T細胞、GM05372E細胞
NCI-SNU-475細胞系相關產(chǎn)品：PANC-02-03細胞、Madison細胞、BHP-10細胞
Kasumi 1細胞系相關產(chǎn)品：Nb2-11細胞、PC.3細胞、SK_N_FI細胞
SU-DHL2細胞系相關產(chǎn)品：HCoEpiC細胞、Oka-C1細胞、TMD8細胞
H2106細胞系相關產(chǎn)品：RIMEC細胞、SW 403細胞、RCC-10RGB細胞
Human Microvascular Endothelial細胞：-1細胞系相關產(chǎn)品：Transformed C3H Mouse Kidney-1細胞、201T細胞、Hs695T細胞
NTera2/D1細胞系相關產(chǎn)品：PK13細胞、LOUNH91細胞、HEK293A細胞
A 549細胞系相關產(chǎn)品：HLEC-SRA 01/04細胞、MMAc-SF細胞、MSB1細胞
H1963細胞系相關產(chǎn)品：SK Col 1細胞、GA-10 clone 4細胞、MCF-7/ADR細胞
H-508細胞系相關產(chǎn)品：LLCPK1細胞、NCIH727細胞、University of Arizona Cell Culture-812細胞
Immortal Pig Intestinal-2I細胞系相關產(chǎn)品：CHO Lec1細胞、LM TK negative細胞、Centre Antoine Lacassagne-27細胞
MO59J細胞系相關產(chǎn)品：PIG3細胞、LICR-LON-HN6細胞、TE7細胞
Lung cancer-1/squamous細胞系相關產(chǎn)品：UM-UC-3細胞、QBC-939細胞、H220細胞
HBZY-1細胞系相關產(chǎn)品：OCI-AML-3細胞、HSC1細胞、P-388細胞
P-36細胞系相關產(chǎn)品：HCT_116細胞、Chinese Hamster Ovary細胞、VM-CUB-1細胞
IOSE80細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H69C細胞、Jurkat E6-1細胞、MGECs細胞
NCI-H146細胞系相關產(chǎn)品：B16-F10細胞、HCC1143細胞、DLD-1細胞
Hs 695.T細胞系相關產(chǎn)品：HSC6細胞、IBRS-2細胞、CHL-11細胞
H64細胞系相關產(chǎn)品：EC109細胞、NCI H82細胞、PLC PRF 5細胞
GM 2132細胞系相關產(chǎn)品：GM04154B細胞、GI-1細胞、EFM-192A細胞
WSU-DLCL(2)細胞系相關產(chǎn)品：MDCK細胞、V 79-4細胞、HCV 29細胞
SJRH 30細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H498細胞、GA-10(Clone 4)細胞、HVSMC細胞
C57/B6-L細胞系相關產(chǎn)品：Hs611T細胞、CCD-112CoN細胞、P3 88 D1細胞
Hs600T細胞系相關產(chǎn)品：SNK1細胞、Hs832T細胞、U20-S細胞
Panc-08.13細胞系相關產(chǎn)品：C4-I細胞、Normal Rat, August 3, 1983細胞、MCF 7細胞
NCI-HUT-596細胞系相關產(chǎn)品：675T細胞、A 253細胞、CWR22Rv1細胞
R3/1細胞系相關產(chǎn)品：JS1細胞、NK-10A細胞、HSC2細胞
UPCI-SCC-154細胞系相關產(chǎn)品：C-28/I2細胞、NCIH209細胞、WM-115細胞
AML-193細胞系相關產(chǎn)品：SNU878細胞、KYSE 30細胞、Kelly細胞
NCIH1105細胞系相關產(chǎn)品：ST 486細胞、CT26.WT細胞、H-1299細胞
BHK細胞系相關產(chǎn)品：TEC細胞、I90細胞、H2085細胞
SC1細胞系相關產(chǎn)品：H-1105細胞、3AO細胞、RH30SJ細胞
SUM-149細胞系相關產(chǎn)品：RAMOS2G64C10細胞、HMEC-1細胞、KYSE-150細胞
NRK clone 52E細胞系相關產(chǎn)品：PBL細胞、ARO81細胞、NIH:OVCAR-5細胞
NRK clone 52E細胞系相關產(chǎn)品：PBL細胞、ARO81細胞、NIH:OVCAR-5細胞
hEEC細胞系相關產(chǎn)品：Pa017C細胞、A-2780細胞、MM.1S細胞
Hs729T細胞系相關產(chǎn)品：NIHOVCAR3細胞、EJ細胞、MDA361細胞
GM 2132細胞系相關產(chǎn)品：GM04154B細胞、GI-1細胞、EFM-192A細胞
SCL-1細胞系相關產(chǎn)品：MDA-MB-175-VII細胞、SO-RB50細胞、NCI-H1581細胞
Co 115細胞系相關產(chǎn)品：COLO829細胞、JHH7細胞、NCIH1688細胞
FHs74 Int細胞系相關產(chǎn)品：HRC-99細胞、Med 283細胞、LO2細胞
IMR32細胞系相關產(chǎn)品：Tu686細胞、TE8細胞、266 Bl細胞
CAMA細胞系相關產(chǎn)品：CAL 51細胞、TSU-Pr1細胞、H929細胞
MBdSMC細胞系相關產(chǎn)品：NCIH810細胞、MC3T3-E細胞、HCT.116細胞
SNK6細胞系相關產(chǎn)品：BJA-B1細胞、H69C細胞、CCC-HPF-1細胞
FLC7細胞系相關產(chǎn)品：GM00346B細胞、OVCAR8細胞、Nb2細胞
ATDC-5細胞系相關產(chǎn)品：KMST-6細胞、OVCAR-3細胞、MBMEC細胞
NS653細胞系相關產(chǎn)品：H1869細胞、LAPC-4細胞、PLA-802細胞
Hep 3B細胞系相關產(chǎn)品：Factor Dependent Continuous-Paterson 1細胞、NT2D1細胞、HDLM2細胞
Lieming Xu-2細胞系相關產(chǎn)品：HSC細胞、HEK/293細胞、MDA231-LM2細胞
L5178Y細胞系相關產(chǎn)品：Transformed Human Liver Epithelial-3細胞、Reuber-H-35 hepatoma細胞、NCIH82細胞
F81細胞系相關產(chǎn)品：SW.620細胞、NCI-H1781細胞、L540細胞
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