"PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：胚胎；成纖維細(xì)胞；NIH Swiss
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細(xì)胞系
細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁
為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代？體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性，也就是說(shuō)當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候，它就會(huì)停止生長(zhǎng)，及時(shí)傳代后，細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷眈肢或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度；讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補(bǔ)加谷酷肢或生長(zhǎng)因子等；用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管爆裂。
細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟：常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時(shí)要注意以下幾點(diǎn)：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個(gè)月充氮一次。液氮溫度達(dá)-１９６℃，使用時(shí)注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu)，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應(yīng)防止焊接部裂開(kāi)。(３)在裝入液氮時(shí)，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo)，使液氮直達(dá)瓶底，如有專(zhuān)用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用，加液氮時(shí)更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無(wú)色新鮮甘油(１２１°C蒸氣高壓消毒)，２mL安瓿(或?qū)Ｓ眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預(yù)冷１５分鐘后，逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)Ｓ美鋬鏊芰瞎苤?，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無(wú)勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱(chēng)和凍存日期，同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類(lèi)及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時(shí)，再移至冰箱冷凍室內(nèi)３～４小時(shí)，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時(shí)，最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存，但為妥善起見(jiàn)，凍存半年后，取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況，然后再繼續(xù)凍存。
細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系
PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細(xì)胞系
細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞的凍存：為避免污染造成的損失，最小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前，細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來(lái)凍存細(xì)胞。對(duì)于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培養(yǎng)基；包含１０%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基；５０%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%甘油的新鮮培養(yǎng)基或５０%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：５０%細(xì)胞條件無(wú)血清培養(yǎng)基和５０%包含有７.５%二甲基亞砜的新鮮的無(wú)血清培養(yǎng)基或包含有７.５%二甲基亞砜和１０%細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)BSA的新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基。懸浮細(xì)胞凍存：計(jì)數(shù)將要凍存的活細(xì)胞。細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。以大約２００～４００g離心５分鐘沉淀細(xì)胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細(xì)胞。以１×１０(７)到５×１０(７)細(xì)胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細(xì)胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在無(wú)血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細(xì)胞。分裝進(jìn)凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開(kāi)始冷凍步驟。細(xì)胞以１℃/分鐘進(jìn)行冷凍，可以通過(guò)可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細(xì)胞凍存：使用分離試劑從基層分離細(xì)胞，分離時(shí)盡可能溫和，使對(duì)細(xì)胞的損傷減少到最小。在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細(xì)胞，確定有活力細(xì)胞數(shù)。以大約２００g離心５分鐘沉淀細(xì)胞。使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細(xì)胞。以５×１０(６)到１×１０(６)細(xì)胞/ml密度，在凍存液中懸浮細(xì)胞。分裝進(jìn)凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開(kāi)始冷凍步驟。細(xì)胞以１℃/分鐘進(jìn)行冷凍，可以通過(guò)可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
LMTK-細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ECV細(xì)胞、MUM2B細(xì)胞、MOLM-13細(xì)胞
Human Liver-7702細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：JiyoyeP-2003細(xì)胞、ATDC5細(xì)胞、LICR-HN-6細(xì)胞
NCIH716細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM03573A細(xì)胞、3D4/21細(xì)胞、AMJ2C8細(xì)胞
LL/2(LLc1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHL/IU細(xì)胞、MDA-MB-361細(xì)胞、SW 1463細(xì)胞
U373MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE85細(xì)胞、C127細(xì)胞、CHP126細(xì)胞
BHP 10-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：W133細(xì)胞、Jurkat clone A3細(xì)胞、RPMI 1788細(xì)胞
Walker256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1993細(xì)胞、kms 11細(xì)胞、624mel細(xì)胞
H-748細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mel624細(xì)胞、MARC 145細(xì)胞、SK-RC 39細(xì)胞
MDA-MB-435 S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA231-LM2細(xì)胞、DHL6細(xì)胞、INS1E細(xì)胞
TE13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1944細(xì)胞、GM05372細(xì)胞、CT26.CL25細(xì)胞
MC3T3-E1 Subclone 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RCF細(xì)胞、H184A1細(xì)胞、CAL 148細(xì)胞
NCI-H1522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H441細(xì)胞、GM03671細(xì)胞、SK-HEP-1細(xì)胞
SUM-52PE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM01232E細(xì)胞、LLC-PK1細(xì)胞、U-226AR1細(xì)胞
MHCC97-L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKCO1細(xì)胞、SACC83細(xì)胞、NCI-H2126細(xì)胞
SHSY5Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1666細(xì)胞、BGC823細(xì)胞、CTV1細(xì)胞
AM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HFLS-RA細(xì)胞、KYSE520細(xì)胞、REC細(xì)胞
HCT15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P-3J細(xì)胞、HuT 102細(xì)胞、OVCAR 8細(xì)胞
MDAMB-231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KTCTL140細(xì)胞、SUM 149PT細(xì)胞、PC3-M細(xì)胞
MIA-PaCa-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Dakiki細(xì)胞、HSC3細(xì)胞、HCPEpiC細(xì)胞
C-28I2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPPVEC細(xì)胞、H-1650細(xì)胞、NCI-H1993細(xì)胞
HCC-2185細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：hTERT RPE-1細(xì)胞、SU-DHL-8細(xì)胞、KYSE140細(xì)胞
HCC-2185細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：hTERT RPE-1細(xì)胞、SU-DHL-8細(xì)胞、KYSE140細(xì)胞
NOZ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H196細(xì)胞、NCI-H-69細(xì)胞、THP-1細(xì)胞
MPP-89細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Adeno-293細(xì)胞、COLO 738細(xì)胞、IBRS2細(xì)胞
E6-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：FRhK-4細(xì)胞、293 c18細(xì)胞、143 B細(xì)胞
MT4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B6Tert-1細(xì)胞、XWLC-05細(xì)胞、MRC-5細(xì)胞
PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細(xì)胞系
4T1-LUC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEL-92.1.7細(xì)胞、BT-325細(xì)胞、H650細(xì)胞
Panc 02細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：T47-D細(xì)胞、Hs675T細(xì)胞、Pan02細(xì)胞
BE2_C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SJRH30細(xì)胞、HN4細(xì)胞、AE1201細(xì)胞
3AO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TH1細(xì)胞、H711細(xì)胞、RN細(xì)胞
2B4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MOPC細(xì)胞、PK 15細(xì)胞、KY180細(xì)胞
ASPC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HT-144細(xì)胞、TE671/RD細(xì)胞、MFM223細(xì)胞
SW480細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HPAEpiC細(xì)胞、SK-LMS-1細(xì)胞、TK-1細(xì)胞
NCI-H2195細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細(xì)胞、HEK 293 EBNA細(xì)胞、VMCUB1細(xì)胞
BrCL12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM2-4175細(xì)胞、HM06.A1細(xì)胞、EOL1細(xì)胞
M-1 myeloid leukemia細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI H69細(xì)胞、H69/P細(xì)胞、RAT2細(xì)胞
UMR106細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TGW-nu細(xì)胞、Panc203細(xì)胞、Mouse INsulinoma 6細(xì)胞
KRC-Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Human Foreskin Fibroblast細(xì)胞、EAC細(xì)胞、Y3M細(xì)胞
HCAEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH522細(xì)胞、H.Ep.-2細(xì)胞、PLC細(xì)胞
HN 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NTERA2細(xì)胞、EFM-192A細(xì)胞、NCI-H1915細(xì)胞
MC9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCD1112Sk細(xì)胞、KYSE-180細(xì)胞、0V-1063細(xì)胞
WM 451-Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC2185細(xì)胞、H-716細(xì)胞、MKN 45細(xì)胞
H-295細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RDES-1細(xì)胞、LOU-NH91細(xì)胞、T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細(xì)胞
OCI-LY-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ROS17/2.8細(xì)胞、MCA38細(xì)胞、HCC-9724細(xì)胞
NE-4C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PK-136細(xì)胞、rRMECs細(xì)胞、NuTu-19細(xì)胞
NCIH841細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C33-A細(xì)胞、HARAB細(xì)胞、NCI-SNU-761細(xì)胞
L-M (TK-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Sp2/0細(xì)胞、SKGT2細(xì)胞、SKG IIIa細(xì)胞
SK_N_BE2C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MSTO-211 H細(xì)胞、NCI-H865細(xì)胞、NCIH2126細(xì)胞
GM04680細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PL11細(xì)胞、KYSE270細(xì)胞、WSU-HN13細(xì)胞
FRTL5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HPASMC細(xì)胞、HARA-B細(xì)胞、FDCP-1細(xì)胞
PC-9S1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TK 10細(xì)胞、MDA-MB436細(xì)胞、RMG-I細(xì)胞
H498細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MES-23.5細(xì)胞、NCI-H676細(xì)胞、Mel-MeWo細(xì)胞
McA-RH7777細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1373細(xì)胞、SUM-149細(xì)胞、SMC-1細(xì)胞
SNGM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H2009細(xì)胞、RT4-D6-P2T細(xì)胞、293-FT細(xì)胞
Hs888 Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NE-4C細(xì)胞、NTERA-2 cl.D1細(xì)胞、Ca9-22細(xì)胞
D283 Med細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：253JB-V細(xì)胞、L 428細(xì)胞、BC3H1細(xì)胞
SNU-484細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：T.T細(xì)胞、KTC-1細(xì)胞、EBNA293細(xì)胞
NCI-H1299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COR-L23細(xì)胞、Madison 109細(xì)胞、C643細(xì)胞
PK(15)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW403細(xì)胞、T/G HA-VSMC細(xì)胞、BGC823細(xì)胞
PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細(xì)胞系
H-87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Panc813細(xì)胞、Karpas299細(xì)胞、ZR75-30細(xì)胞
Mono-Mac-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ssMCF7細(xì)胞、ATC241細(xì)胞、Normal Rat Kidney細(xì)胞
Mono-Mac-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ssMCF7細(xì)胞、ATC241細(xì)胞、Normal Rat Kidney細(xì)胞
P 3 HR 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-MEL-31細(xì)胞、Monomac-1細(xì)胞、NCI-HUT-460細(xì)胞
ZR-75-30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EBC-1/original細(xì)胞、SiHa細(xì)胞、EAC-E2G8細(xì)胞
SK Mel 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCAR 5細(xì)胞、MUG-Chor1細(xì)胞、SW-579細(xì)胞
HIT T15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SuDHL 8細(xì)胞、DH82細(xì)胞、TCMK-1細(xì)胞
COR-L23細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CF Pac1細(xì)胞、J774A1細(xì)胞、NFS 60細(xì)胞
COS7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BALB/3T3 cl. A31細(xì)胞、HR1K細(xì)胞、Vx2細(xì)胞
LC-1-sq細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RH35細(xì)胞、P30OHK細(xì)胞、Panc_03_27細(xì)胞
HCC-1395細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCaBER細(xì)胞、MOLP8細(xì)胞、HO1-N1細(xì)胞
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