"PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細胞系
細胞背景資料：胚胎；成纖維細胞
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析：總結(jié)１：復(fù)蘇過程沒有問題，是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度，培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS １５-２０%，看看能否幫助貼壁，當然也需要考慮血清問題，還有確信拿來的細胞沒問題?？偨Y(jié)２：首先應(yīng)該懷疑凍存，實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小，因為操作簡單，而且死板。１、你凍存的時候是不是消化的時間過長，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個問題，太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序，不可逆轉(zhuǎn)的死亡。２、你的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質(zhì)量非常重要，否則也會死亡。３、你的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過７%，大于５%，太多也不好。４、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。５、你的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴格，很多人容易忘卻這個事情，因為這個東西流程長。６、如果你細胞污染，你是否能很快看到，我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。７、你的細胞在凍存前是否過密。還有，不贊成孵箱污染這個概念的，所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話，這個細菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌，問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題，這個很重要，不能靠猜，否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題，這個見得太多了，別不當會事。
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細胞系
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
血清必須貯存于–２０～-７０℃，若存放于４℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將４０～４５ml分裝于無菌５０ml離心管中，由于血清結(jié)凍時體積會增加約１０%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。瓶裝(５００ml)血清解凍步驟(逐步解凍法)：-２０℃或–７０℃至４℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以５０ml無菌離心管可分裝４０～４５ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于３７℃太久，若在３７℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成，這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物，可用離心３０００rpm，５min去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”：通常經(jīng)過熱處理之血清，沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為血清遭受污染，而將血清放在３７℃中欲培養(yǎng)此“微生物”，但在３７℃環(huán)境下，又會使此沈淀物增多，更會誤認為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點應(yīng)不會影響細胞之生長，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批號的血清。
HCT8細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3 NS1 Ag4細胞、G361mel細胞、MDA MB231細胞
MDA-361細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF7-CTRL細胞、C-28/I2細胞、MFE-280細胞
OV1063細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE-30細胞、Colon38細胞、KMS-18細胞
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
MA-104細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Rin-M-5F細胞、RT4-D6P2T細胞、UMR106細胞
MA-104細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Rin-M-5F細胞、RT4-D6P2T細胞、UMR106細胞
Med 341細胞系相關(guān)產(chǎn)品：373MG細胞、HG2855細胞、U-87 MG細胞
細胞生長特性：貼壁
PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細胞系
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié)：１)一般客戶拿到細胞后，應(yīng)該注意什么？客戶收到細胞后先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞１００X，２００X各一張)，排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過８０%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下１０ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過８０%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、１０００轉(zhuǎn)/分鐘離心２分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制；２)快遞細胞多久能到，是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞？我們采用快遞發(fā)貨，一般外地２--３天，寄細胞前請確認當?shù)販囟?，如果氣溫低于４度的，則采用郵寄凍存細胞；３)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應(yīng)，造成細胞無法存活；４)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
Reuber H-35細胞系相關(guān)產(chǎn)品：STO細胞、Hs940-T細胞、PL 5細胞
WM2664細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-172 MG細胞、P3J HR1-K細胞、KYSE 50細胞
HEK.EBNA細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH2196細胞、WM115F細胞、NCIH226細胞
WSU-DLCL-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UWB1.289+BRCA1細胞、MuM-2C細胞、H.Ep.-2細胞
SW-13細胞系相關(guān)產(chǎn)品：B35細胞、RH35細胞、MCF-7B細胞
BE(2)-M17細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-774細胞、A2780細胞、beta-TC6細胞
WM-266-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCD-966SK細胞、T-HSC細胞、MCF-7/ADR-RES細胞
PANC 203細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE4細胞、WEHI-3細胞、L-WRN細胞
Vero細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H3255細胞、A-375SM細胞、32D.3細胞
SKO-007細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1833細胞、NBL-5細胞、HKBML細胞
Walker 256細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Centre Antoine Lacassagne-85-1細胞、GBC-SD細胞、BHP 10-3細胞
EOC 20細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-N-BE(1)n細胞、HRMC細胞、CORL23細胞
OSC-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BE2_C細胞、MDA 1386細胞、CL 1-0細胞
PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細胞系
SN12C-PM6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NBL-5細胞、SK-N-FI細胞、Strain KB細胞
ECV304細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H82細胞、3T3L1細胞、GOS-3細胞
CCRF.CEM細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCIAML2細胞、SUDHL-16細胞、Hs 688(A).T細胞
CCRF.CEM細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCIAML2細胞、SUDHL-16細胞、Hs 688(A).T細胞
BC-3-H-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHP126細胞、Lewis Lung細胞、NBL-3細胞
IM 9細胞系相關(guān)產(chǎn)品：3T3 J2細胞、16HBEo-細胞、PANC 203細胞
Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mono Mac 6細胞、HOS-MNNG細胞、LN-229細胞
NB-9細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LYR細胞、HEM細胞、HEK-AD 293細胞
MN 60細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H719細胞、639-V細胞、MZCRC1細胞
RBL 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：DMS79細胞、NIH-OVCAR-3細胞、HeLa S-3細胞
KTCTL-140細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C518細胞、COLO 684細胞、H-1954細胞
OVCAR.5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2052細胞、LCLC103H細胞、NS1-Ag4細胞
H460細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Karpas 299細胞、87MG細胞、MA 104細胞
H69C細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H522細胞、MEF (CF-1)細胞、Jurkat E6-1細胞
Hs-578-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H2196細胞、OKa-C-1細胞、H-2228細胞
Wien 133細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1404細胞、KLM-1細胞、MNNG細胞
HuP-T4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LAN-6細胞、OCI/AML-2細胞、EL4細胞
SK-MES-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NEC細胞、SU-86-86細胞、Simpson細胞
NIH:OVCAR4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Ly8細胞、CHL-1細胞、DK-MG細胞
UMNSAH-DF 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EOL1細胞、SK.MEL.2細胞、H2052_MM細胞
Earle's L cells細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MGECs細胞、NCI-SNU-620細胞、JHH7細胞
Epithelioma Papulosum Cyprini細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EOMA細胞、McCoy B細胞、MES-SA Dx5細胞
Nthy ori 3.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKOV-3細胞、CAMA1細胞、RDES細胞
Baby Hamster Kidney-21細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UMC-11細胞、SW527細胞、HCC4006細胞
CEM/C1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2106細胞、DH-82細胞、NK-92.05細胞
Hs27細胞系相關(guān)產(chǎn)品：K299細胞、OS-732細胞、HCC-44細胞
H2009細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF7細胞、OC-316細胞、HEK293-H細胞
RS4-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1688細胞、H-292細胞、C-643細胞
SAS細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GA-10-Clone-4細胞、NPA細胞、H-650細胞
HSF2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ssMCF-7細胞、Homo sapiens No. 578, breast cells細胞、NCI-H2196細胞
TE9細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM03569細胞、NCIH838細胞、RPMI-6666細胞
KYSE-180細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUM190細胞、PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細胞、SKNBE(1)細胞
SCC15細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1092細胞、NCI-H1694細胞、Colo699細胞
RIN-m5F細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIN87細胞、CCC-HHM-2細胞、639V細胞
COLO 320DM細胞系相關(guān)產(chǎn)品：4T1.2細胞、R2C細胞、C3H/10T1/2 CL8細胞
MM6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Kit225細胞、Rabbit Kidney 13細胞、C3A細胞
NP-69細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-4-II-E細胞、Huh7.5細胞、NCIH1105細胞
GM3190細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RS4-11細胞、C17.2細胞、Hep 3B2.1-7細胞
BEL7402細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Radiation Effects Research Foundation-Lung Cancer-MS細胞、2PK3細胞、Potorous tridactylus Kidney 2細胞
H-1672細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC3M細胞、Calu-3細胞、SK MEL 28細胞
RH30SJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品：End1/E6E7細胞、TCC-SUP細胞、HT22細胞
SK-N-AS細胞系相關(guān)產(chǎn)品：FDCP-1細胞、NCI N87細胞、CCRF細胞
PG13 Adherent逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細胞系
Hs895.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BMU-S1細胞、D10細胞、H1395細胞
NB19細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IHC-ST1細胞、U-251 MG細胞、NCI-H1869細胞
CHL/IU細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-747細胞、DoTc2細胞、MOLP8細胞
KMS11細胞系相關(guān)產(chǎn)品：B 95-8細胞、HCA-7細胞、RBMEC細胞
SACC-83細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM-TK-細胞、SGC996細胞、HCC-38細胞
SKNO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEC-151細胞、IEC-18細胞、C32 [Human melanoma]細胞
KYSE-140細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-MB-453細胞、PCI-SG231細胞、BV-2細胞
HuT102細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PLA-801D細胞、RPMI-8226細胞、NCl-H157細胞
SK MEL 5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCA 420細胞、AKR細胞、Case 3細胞
SHEE細胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO320/DM細胞、SK-Mel 2細胞、NCIH847細胞
HEp-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Jurkat-E6細胞、H-889細胞、RGC-6細胞
HEK AD293細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3-X63.Ag8.653細胞、LN229細胞、SU4細胞
"