"KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：結(jié)腸癌
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng)：１.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細(xì)胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢，會(huì)造成細(xì)胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細(xì)胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè)，去除DMSO，去除死細(xì)胞，這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程，但對一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間，轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少，細(xì)胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇，結(jié)果無異常。５.細(xì)胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)１ml細(xì)胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。６.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題：試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇１管細(xì)胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細(xì)胞濃度過低，不利于細(xì)胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會(huì)比較大，就會(huì)影響細(xì)胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響，還有一個(gè)說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細(xì)胞生長：貼壁
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞系
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
血清必須貯存于–２０～-７０℃，若存放于４℃，請勿超過一個(gè)月。如果一次無法用完一瓶，可將４０～４５ml分裝于無菌５０ml離心管中，由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約１０%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。瓶裝(５００ml)血清解凍步驟(逐步解凍法)：-２０℃或–７０℃至４℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以５０ml無菌離心管可分裝４０～４５ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于３７℃太久，若在３７℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會(huì)因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成，這些凝絮沈淀物不會(huì)影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物，可用離心３０００rpm，５min去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因?yàn)闀?huì)阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”：通常經(jīng)過熱處理之血清，沈淀物的形成會(huì)顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”，常會(huì)誤認(rèn)為血清遭受污染，而將血清放在３７℃中欲培養(yǎng)此“微生物”，但在３７℃環(huán)境下，又會(huì)使此沈淀物增多，更會(huì)誤認(rèn)為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點(diǎn)應(yīng)不會(huì)影響細(xì)胞之生長，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批號的血清。
NK92MI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE 450細(xì)胞、Biologics Standards-Cercopithecus-1細(xì)胞、Lu99A細(xì)胞
USMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UT7細(xì)胞、Hs 840.T細(xì)胞、HEK-293-F細(xì)胞
ID8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IPI-2I細(xì)胞、RA 1細(xì)胞、FHs 74 Int細(xì)胞
細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
TGBC11T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Co 205細(xì)胞、CLONE M3細(xì)胞、CMT167細(xì)胞
NCI-H1963細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IMR-90細(xì)胞、MSB1細(xì)胞、OsA-CL細(xì)胞
Panc 8.13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BC-3H-1細(xì)胞、TOV-112D細(xì)胞、Medical Research Council cell strain-5細(xì)胞
細(xì)胞生長特性：貼壁
KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞系
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書
培養(yǎng)細(xì)胞真的不難，最關(guān)鍵幾點(diǎn)：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的，真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞；２)動(dòng)作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時(shí)間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候是傳代的原因；３)有時(shí)間的話，需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線，不會(huì)臨時(shí)要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時(shí)間，傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時(shí)間，也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn)；５)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?１)嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套；３)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟，勤換(滅菌水加進(jìn)去)；５)晚上離開的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外，超凈臺(tái)是用完就開；６)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。
GM2219C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：AK細(xì)胞、HEK 293-EBNA細(xì)胞、Loucy細(xì)胞
WERI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OV3121細(xì)胞、AHH1細(xì)胞、HAC-84細(xì)胞
EAhy926細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs.27細(xì)胞、C-33 A細(xì)胞、NCI-322細(xì)胞
CCRF CEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ARO81-1細(xì)胞、MKN 7細(xì)胞、2PK-3細(xì)胞
IAR-20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM1細(xì)胞、VA-ES-BJ細(xì)胞、BE(2)-M17細(xì)胞
CPA 47細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1954-BL細(xì)胞、CEM T4細(xì)胞、FHL-124細(xì)胞
OLN93細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Medical Research Council cell strain-5細(xì)胞、Panc 02.03細(xì)胞、SCC 15細(xì)胞
KPNRTBM1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：32D clone3細(xì)胞、H 9細(xì)胞、CP-70細(xì)胞
P-36細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT_116細(xì)胞、Chinese Hamster Ovary細(xì)胞、VM-CUB-1細(xì)胞
H-1437細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-64細(xì)胞、L02細(xì)胞、PA-TU S細(xì)胞
U-373-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC 3T3-E1細(xì)胞、WSU-DLCL-2細(xì)胞、PANC0327細(xì)胞
NCI-H1184細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H748細(xì)胞、L363細(xì)胞、Hs 870.T細(xì)胞
U-373 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-132細(xì)胞、Huh7.5.1細(xì)胞、GS9L細(xì)胞
KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞系
LS123細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-68細(xì)胞、A-172 MG細(xì)胞、HSMC細(xì)胞
Lec1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ChaGo-K-1細(xì)胞、Caco-2/BBe 1細(xì)胞、EOMA細(xì)胞
HL 60細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 948細(xì)胞、B-104細(xì)胞、RERFLCMS細(xì)胞
HL 60細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 948細(xì)胞、B-104細(xì)胞、RERFLCMS細(xì)胞
ATDC-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KMST-6細(xì)胞、OVCAR-3細(xì)胞、MBMEC細(xì)胞
NCIH292細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS 683T細(xì)胞、Beta-TC-6細(xì)胞、BRL細(xì)胞
DU 4475細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：WRL68細(xì)胞、32D.cl3細(xì)胞、K562/ADR細(xì)胞
Immortalized Human Hepatocytes細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-7721細(xì)胞、H-774細(xì)胞、CaES-17細(xì)胞
B16-BL6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C6661細(xì)胞、COLO 357細(xì)胞、HLEC-B3細(xì)胞
Cor L88細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1573細(xì)胞、SW-900細(xì)胞、CV1細(xì)胞
CZ-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ST細(xì)胞、EFO-27細(xì)胞、HMC細(xì)胞
H4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：M1細(xì)胞、RPMI-2650細(xì)胞、SNU761細(xì)胞
786.O細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH2347細(xì)胞、Caov-3細(xì)胞、NCIH1838細(xì)胞
Hep-G2/C3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：alpha TC1-6細(xì)胞、BJA-B-1細(xì)胞、aTC1-6細(xì)胞
NCIH1395細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C2-C12細(xì)胞、MH-S細(xì)胞、BJAB-1細(xì)胞
WSU-DLCL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UWB1.289+BRCA1細(xì)胞、MuM-2C細(xì)胞、H.Ep.-2細(xì)胞
SK RC 20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OV1-P細(xì)胞、3T3-J2細(xì)胞、P3X63Ag8細(xì)胞
H-2108細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK;293細(xì)胞、KM932細(xì)胞、HS578細(xì)胞
HCC-202細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RT4細(xì)胞、NB1-RGB細(xì)胞、ND7/23細(xì)胞
DHL10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1793細(xì)胞、TB-1 Lu細(xì)胞、32D CL3細(xì)胞
L cells細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HMC3細(xì)胞、M619細(xì)胞、MKN 28細(xì)胞
NCI-H2087細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW962細(xì)胞、2B4細(xì)胞、KYSE30細(xì)胞
NCI-H841細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BNL.1ME A.7R.1細(xì)胞、NOZAWA細(xì)胞、Colo16細(xì)胞
NTERA-2 clone D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H226細(xì)胞、H-226細(xì)胞、C81-61細(xì)胞
PE/CA-PJ-34細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-OV-433細(xì)胞、SUM52細(xì)胞、S-16細(xì)胞
KP 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Saos2細(xì)胞、D341Med細(xì)胞、CCD 19Lu細(xì)胞
CF Pac1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：bEND.3細(xì)胞、32D-Cl3細(xì)胞、HCC-1588細(xì)胞
HET1A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COR-L279細(xì)胞、Mv 1 Lu細(xì)胞、HAVSMC細(xì)胞
Hs 729T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA175細(xì)胞、3T3-F442A細(xì)胞、SW1463細(xì)胞
MADB 106細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT FET細(xì)胞、KMS18細(xì)胞、KMS18細(xì)胞
Jurkat77細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCEC細(xì)胞、P3.times.63 Ag8.653細(xì)胞、H766T細(xì)胞
H-920細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：JVM3細(xì)胞、SNU475細(xì)胞、NCIH2052細(xì)胞
H69/P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mo 59J細(xì)胞、SNU-1040細(xì)胞、HFT-8810細(xì)胞
CT26WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RAW-264.7細(xì)胞、hRMECs細(xì)胞、P3JHR-1細(xì)胞
SU-DHL1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs695細(xì)胞、HEC1B細(xì)胞、Mono-Mac-6細(xì)胞
TE-671細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LM8細(xì)胞、P3/NS1/Ag4-1細(xì)胞、ROS 17/28細(xì)胞
HOS-143B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DSL6A/C1細(xì)胞、SK_N_FI細(xì)胞、RCCJF細(xì)胞
DH82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IM-95細(xì)胞、J774 A1細(xì)胞、NCIH1793細(xì)胞
IBRS2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DoTc2-4510細(xì)胞、NCI-H1092細(xì)胞、SW780細(xì)胞
Hi-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1438細(xì)胞、SNU-C2A細(xì)胞、As-PC1細(xì)胞
BPH-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H711細(xì)胞、HEK;293細(xì)胞、Hs-746T細(xì)胞
NK 10a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1734細(xì)胞、alpha TC1.6細(xì)胞、MPP-89細(xì)胞
KM12-SM Adherent人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞系
SK Col 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KOSC-2細(xì)胞、NCIH2228細(xì)胞、NCI H929細(xì)胞
Li-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCTC clone 929細(xì)胞、Balb/3T3-4-Cl31細(xì)胞、VM-CUB-I細(xì)胞
NP69SV40T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC3T3E1細(xì)胞、HOEC細(xì)胞、MGHU1細(xì)胞
KHYG1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：no-11細(xì)胞、Michigan Cancer Foundation-12A細(xì)胞、P30OHK細(xì)胞
MDA-MB-231-GFP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EJ細(xì)胞、LuCL4細(xì)胞、BTI-Tn-5B1-4細(xì)胞
U14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IFRS1細(xì)胞、DR2R 1610細(xì)胞、H-1838細(xì)胞
Hs895T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Roswell Park Memorial Institute 7951細(xì)胞、SK-N-AS細(xì)胞、MOLP2細(xì)胞
SRS-82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BIC-1細(xì)胞、MDA-MB415細(xì)胞、UMNSAH-DF-1細(xì)胞
NCI-H1650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P30/0HK細(xì)胞、Normal fibroblast-10細(xì)胞、SKRC-42細(xì)胞
MH7A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HOK細(xì)胞、Rat 1細(xì)胞、kms 11細(xì)胞
T-98細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKml2細(xì)胞、SNU-368細(xì)胞、NCI-H2347細(xì)胞
EAhy926細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs.27細(xì)胞、HANK-1細(xì)胞、mREC細(xì)胞
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