"RF/6A Adherent猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系
細胞背景資料：脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜；內(nèi)皮細胞；自發(fā)永生
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu)，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣高壓消毒)，２mL安瓿(或?qū)Ｓ眉毎麅龃婀?、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或?qū)Ｓ美鋬鏊芰瞎苤?，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內(nèi)３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，最后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
RF/6A Adherent猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
最近在培養(yǎng)細胞時，發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好，很容易扎堆生長，用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來，很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的，傳代的第二天，有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢？你好，我養(yǎng)的細胞和你一樣，消化下來也是一團的，但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻，分皿后在鏡下看一看，移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕，避免晃動。細胞生長挺快，那么細胞的增殖能力應該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能：一、細胞消化后吹打不均勻，造成細胞成團生長：二、細胞細化太過，細胞成片脫落，吹打時沒有受力點，細胞聚團生長。解決辦法：根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化，將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng)：一般步驟為：真空泵吸走培養(yǎng)基，１XPBS漂洗兩次，加入１mlEDTA-Tripsin（１００mm皿為例），３７度放置數(shù)分鐘，輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量血清，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊，離心后加入新鮮培養(yǎng)基，按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間，若胰酶處理太久，容易造成細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。我談?wù)剛€人經(jīng)驗：HepG-２、A５４９、Hela、SGC-７９０１幾種癌細胞處理時間可適當放長，一般處理５-６min，C２C１２、COS-７、NIH-３T３比較容易脫落，２min足矣，P１９Cl６和２９３細胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。
HCE-2 [50.B1]細胞系相關(guān)產(chǎn)品：G-401細胞、HRA-19細胞、NCIH378細胞
LTEP-a2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：S37細胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-1細胞、WRL68細胞
MCF-7B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Jurkat E6.1細胞、TFK-1細胞、NCIH1703細胞
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
SUP-M2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW1271細胞、D283MED細胞、Baby Hamster Kidney-21細胞
HEY-A8細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1395細胞、SNU520細胞、CHO cell clone K1細胞
HCC0015細胞系相關(guān)產(chǎn)品：COV434細胞、IBMF-7細胞、IMCD-3細胞
細胞生長特性：貼壁
RF/6A Adherent猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代？體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度；讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補加谷酷肢或生長因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物，檢測支原體。冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。
WM239A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC-3M-IE8細胞、OVCAR420細胞、TCMK1細胞
Lewis Lung細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WEHI231細胞、UMNSAH/DF#1細胞、LIXC-002細胞
NRCC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Fu97細胞、8505C細胞、COLO320HSR細胞
HMO6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NG 108-15細胞、CNE2Z細胞、H-378細胞
H596細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GA-10(Clone 4)細胞、CCD 19Lu細胞、Dakiki細胞
OAW42細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAC細胞、M210B4細胞、MDA-MB-175-VII細胞
BSC-40細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC/9細胞、WiDrTC細胞、ANA1細胞
CACO2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PCI:SG231細胞、HFB細胞、GBCSD細胞
H22細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE 70細胞、Y3Ag1.2.3細胞、Glioma 261細胞
HeLa.S3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ND7/23細胞、Ocular Choroidal Melanoma-1細胞、BT474細胞
K1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：McCoy B細胞、PLA-802細胞、PNEC30細胞
SW 962細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCI-Ly07細胞、MMAc.SF細胞、SNU-119細胞
P3-NS1/1-Ag4-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NHLF細胞、NCI-H524細胞、Caco 2細胞
RF/6A Adherent猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系
PANC 1005細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BEP2D細胞、Psi-2-DAP細胞、JVM-3細胞
NP-69細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-4-II-E細胞、Huh7.5細胞、NCIH1105細胞
KCL22S細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10細胞、SHG-44細胞、SK UT 1細胞
KCL22S細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10細胞、SHG-44細胞、SK UT 1細胞
MCF 7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：293-GP細胞、MyLa2059細胞、NCI-H2444細胞
HS-940-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs940-T細胞、WILL-2細胞、HSF2細胞
Colo-206F細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Shadyside Hospital Pittsburgh-77細胞、V-79細胞、NCI-H1930細胞
3T3 J2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Henrietta Lacks cells細胞、RPMI 8402細胞、G-401細胞
GC-2spd(ts)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2細胞、TMD8細胞、SKNBE-1細胞
Hs 766細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUM52PE細胞、A172細胞、HF-91細胞
SW-982細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LADMAC細胞、C4I細胞、YD-38細胞
HES [Human embryonic skin fibroblast]細胞系相關(guān)產(chǎn)品：QSG7701細胞、HOP62細胞、THPI細胞
Hepa-RG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SF 763細胞、DHL4細胞、NCIH1373細胞
WIL2 S細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OSKM-1細胞、SW-1222細胞、HCC-2218細胞
MM1S細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-1210細胞、FAT細胞、B5537SKIN細胞
SK-MEL-24細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HL 60細胞、EM-3細胞、NuTu 19細胞
MH-22a細胞系相關(guān)產(chǎn)品：High-5細胞、NCI-H2286細胞、P3-NS1/1Ag 4.1細胞
AML-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCI-Ly7細胞、NCI-H1755細胞、C-28I2細胞
MGC-803細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NMC-G1細胞、Leukemic 1210細胞、SKMEL-24細胞
L02細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1651細胞、NCI-H1435細胞、B958細胞
NCIH1623細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MRC5細胞、PLA801-95D細胞、HRA19細胞
A72細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JROECL19細胞、P3/NS1/1-Ag4.1細胞、PF382細胞
GM04154B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CG-4細胞、HCV-29細胞、SNU-354細胞
Pt K2 (NBL-5)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NP69SV40T細胞、Cor L88細胞、NCIH1650細胞
CCD 19Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE 671細胞、HCC1569細胞、H2198細胞
A-427細胞系相關(guān)產(chǎn)品：D407細胞、Centre Antoine Lacassagne-62細胞、SL-1細胞
Caki-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NPA-87細胞、NCIH929細胞、GM-3573細胞
H-1975細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-MEL-28細胞、U-343-MG細胞、PT67細胞
NUGC-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LNCaP C4-2細胞、HBE 135-E6/E7細胞、H1703細胞
Rat Fetal Lung-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JB6 [Mouse]細胞、HUV-EC-C細胞、SK-MEL-2細胞
NHEK細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA 435細胞、526 mel細胞、OCI-Ly 18細胞
SNU620細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H196細胞、NCI-H1838細胞、DU-145細胞
HLE-B3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：2PK-3細胞、HTSMC細胞、RPE-hTERT細胞
TO 175.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RAW264.7細胞、HCC70細胞、SCL2細胞
MSTO-211H細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-748細胞、Bx-PC3細胞、ECGI10細胞
LIXC-002細胞系相關(guān)產(chǎn)品：B4G12細胞、MRC9細胞、M059J細胞
TM-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LS174細胞、3T3-A31細胞、746T細胞
VMM-5A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CC-LP-I細胞、AtT20細胞、PL-9細胞
Tn-5B1-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OSC-19細胞、MNNG-HOS細胞、HL-60 Clone 15細胞
LTEPa2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-484細胞、PTK-1細胞、MADB106細胞
H-748細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mel624細胞、MARC 145細胞、SK-RC 39細胞
HCC-827細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF-7B細胞、NCI-H1341細胞、SW 527細胞
RF/6A Adherent猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞系
HSC4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1105細胞、mIMCD-3細胞、NSH細胞
Sp 2817細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI1846細胞、OUMS27細胞、NCI-BL6細胞
Hs 819.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MPVECs細胞、NU-GC-3細胞、M3 Clone M-3細胞
HR-8348細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MV(4;11)細胞、NCI-H441細胞、PLC/PRF5細胞
Henrietta Lacks cells細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IM 9細胞、OVHM細胞、MOLT16細胞
TGBC11TKB細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH2085細胞、NCTC-3960細胞、OVCAR-433細胞
Co 205細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs1.Tes細胞、KNS81細胞、KYSE 270細胞
Tn5B1-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細胞、B16/F10細胞、RCC10RGB細胞
UWB1-289細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A2780/CP細胞、HHFK細胞、DBTRG-05MG細胞
ARO81-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IBRS2細胞、COLO 738細胞、T-98細胞
High5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C2BBe 1細胞、CEF細胞、RetroPack PT67細胞
NRCC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Fu97細胞、PL11細胞、SNU-16細胞
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