"KG-1a Lymphoblastoid cells人急性骨髓白血病細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:急性髓系白血病;男性 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識(shí),在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細(xì)胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會(huì)比較大,就會(huì)影響細(xì)胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個(gè)說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 Gejiu Lung Carcinoma-82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1395細(xì)胞、87 MG細(xì)胞、OCILY-3細(xì)胞 Calu-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-140細(xì)胞、BCAP37細(xì)胞、NCI-BL2141細(xì)胞 CSQT-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Blotchy fibroblast-11細(xì)胞、COR-L88細(xì)胞、BT-474細(xì)胞 細(xì)胞生長:懸浮 KG-1a Lymphoblastoid cells人急性骨髓白血病細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞學(xué)在生命科學(xué)科中起著至關(guān)重要的作用,近年來細(xì)胞學(xué)蓬勃發(fā)展,并取得了重大的進(jìn)展,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)建也是各個(gè)院校生物學(xué)科必備的實(shí)驗(yàn)室。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)謹(jǐn)慎復(fù)雜,需要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備種類繁多,下面就一些動(dòng)物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室必備儀器進(jìn)行簡單介紹:CO2培養(yǎng)箱是細(xì)胞培養(yǎng)的必備儀器,它為細(xì)胞提供了一個(gè)體外培養(yǎng)的舒適環(huán)境,如適宜的溫度、濕度、酸堿度、O2濃度等。細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)很容易受到各種細(xì)菌、微生物的感染,因此,CO2培養(yǎng)箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要。純水系統(tǒng):細(xì)胞培養(yǎng)用水一般要求雙蒸水,實(shí)際上普通蒸餾水經(jīng)玻璃器皿中按標(biāo)準(zhǔn)方法蒸餾二次得到的雙蒸水是不能滿足要求的,而且水中的內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長和傳代;內(nèi)毒素含量過高,會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。因此建議配置正式的水純化系統(tǒng)。超凈工作臺(tái)/生物安全柜:細(xì)胞培養(yǎng)對無菌環(huán)境要求很高,在細(xì)胞操作時(shí),一般需要在100級(jí)空氣質(zhì)量條件下進(jìn)行,因此超凈工作臺(tái)或生物安全柜就必須配備。液氮罐:為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃,因此,需要液氮罐。在此環(huán)境中,一般細(xì)胞可以保存十年具有活性。超低溫冰箱:細(xì)胞的凍存過程需要一系列程序降溫,一般4℃下存放30min,轉(zhuǎn)放-20℃ 1 hour,再轉(zhuǎn)入-70至-80℃過夜,之后才可以轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(-196℃),這時(shí)就必須配備一臺(tái)-86℃超低溫冰箱。一般超低溫冰箱保存細(xì)胞可達(dá)數(shù)月,對于不需要長期凍存的細(xì)胞,可暫時(shí)放于超低溫冰箱保存。恒溫水?。簭囊旱虺蜏乇渲腥〕黾?xì)胞凍存管需要立即放于37℃水浴中快速復(fù)蘇之后才傳代培養(yǎng),因此,恒溫水浴也是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室必備儀器。離心機(jī):細(xì)胞培養(yǎng)需要離心收集傳代細(xì)胞,所以需要配置低速的常溫離心機(jī),對于后期細(xì)胞內(nèi)容物的分離則需要高速冷凍離心機(jī)。移液器和細(xì)胞培養(yǎng)的大量耗材:細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中有大量頻繁的移液操作,因此各種微量移液器、瓶口分配器、移液管控制器是必不可少的。各類細(xì)胞培養(yǎng)板、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、移液管等耗材更是不可或缺的,而且一次性,用量極大。除上述儀器外,高壓滅菌鍋、倒置顯微鏡也是細(xì)胞培養(yǎng)的必備儀器,發(fā)酵罐、轉(zhuǎn)瓶機(jī)等也常常見于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 32D CL3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H87細(xì)胞、Colo-201細(xì)胞、DAKIKI Clone 1細(xì)胞 ROS 17/2.8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLFa細(xì)胞、293 Ad5細(xì)胞、UMNSAH-DF 1細(xì)胞 KP-N-YN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-954細(xì)胞、Bovine ENDometrial cells細(xì)胞、COV504細(xì)胞 C4-2 B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AR41P細(xì)胞、EB-3細(xì)胞、Panc-813細(xì)胞 Y3-Ag1,2,3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO-8910細(xì)胞、CD18/HPAF細(xì)胞、LLC-MK2細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 KG-1a Lymphoblastoid cells人急性骨髓白血病細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:懸浮 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動(dòng)作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時(shí)間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時(shí)候是傳代的原因;3)有時(shí)間的話,需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線,不會(huì)臨時(shí)要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時(shí)間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時(shí)間,也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺(tái)是用完就開;6)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 COLO206細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NALM-6-M1細(xì)胞、H-II-E-C3細(xì)胞、SU-DHL-16細(xì)胞 Farage OL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:F-36P細(xì)胞、SK-RC 52細(xì)胞、SK-MEL5細(xì)胞 INS1E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC1B細(xì)胞、KTCTL140細(xì)胞、HEK 293T/17細(xì)胞 mousepodocyte細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HH [Human lymphoma]細(xì)胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細(xì)胞、MCA-38細(xì)胞 NCI-H1385細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCCSUP細(xì)胞、H1703細(xì)胞、LYR細(xì)胞 MIA-PaCa-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Dakiki細(xì)胞、HSC3細(xì)胞、HCPEpiC細(xì)胞 NRK clone 49F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H322T細(xì)胞、OVCA-420細(xì)胞、OE21細(xì)胞 38C-13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAVER細(xì)胞、HT-3細(xì)胞、U343細(xì)胞 Medical Research Council cell strain-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH441細(xì)胞、T24(ECV304)細(xì)胞、H4-II-E-C3細(xì)胞 SUPB15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SN12C-PM6細(xì)胞、HRPEpiC細(xì)胞、A 2058細(xì)胞 KG-1a Lymphoblastoid cells人急性骨髓白血病細(xì)胞系 H-187細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs27F細(xì)胞、MDA-MB468細(xì)胞、JTC-39細(xì)胞 HCC2279細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuCC-T1細(xì)胞、NCIH446細(xì)胞、LIM-1215細(xì)胞 MCMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IB-RS2細(xì)胞、HUT28細(xì)胞、PC-3/M細(xì)胞 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