"P31/FUJ Lymphoblastoid cells人急性單核白血病細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 ONS-76細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3D4/21細(xì)胞、SC細(xì)胞、KRC Y細(xì)胞 beta TC6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI1788細(xì)胞、HUVEC-C[HUVEC]細(xì)胞、STTG1細(xì)胞 NW-MEL-38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LL/2(LLc1)細(xì)胞、D324 Med細(xì)胞、NCIH1944細(xì)胞 細(xì)胞生長:懸浮 P31/FUJ Lymphoblastoid cells人急性單核白血病細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異,有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購買,培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,的策略是進(jìn)行低溫保存。這對(duì)于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?,F(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細(xì)胞要快速融化,并直接加入完全生長培養(yǎng)基中。若細(xì)胞對(duì)凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml完全生長培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細(xì)胞/ml;培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時(shí),更換新鮮的完全生長培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml完全生長培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞,并且進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞鋪板,細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細(xì)胞/ml。細(xì)胞的分化:一個(gè)成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個(gè),可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細(xì)胞均來自一個(gè)受精卵細(xì)胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細(xì)胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,這個(gè)過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長不斷分裂的細(xì)胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細(xì)胞周期中G1期開始時(shí)一個(gè)確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,它們的基因表達(dá)和代謝活動(dòng)各不相同。 細(xì)胞傳代方法:1:5傳代 TCCSUP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DiFi細(xì)胞、FOX-NY細(xì)胞、KYSE-70細(xì)胞 MASMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-468-RED細(xì)胞、K562/ADR細(xì)胞、RPMI8226細(xì)胞 H1836細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1581細(xì)胞、MUGCHOR1細(xì)胞、GM00215A細(xì)胞 LL/2(LLc1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHL/IU細(xì)胞、MDA-MB-361細(xì)胞、SW 1463細(xì)胞 UT7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MEG01細(xì)胞、TE-671細(xì)胞、T/GHA-VSMC細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 P31/FUJ Lymphoblastoid cells人急性單核白血病細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 526 mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RTE細(xì)胞、293-EBNA細(xì)胞、Biologics Standards-Cercopithecus-1細(xì)胞 SCC 15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VeroC1008細(xì)胞、NCI-H522細(xì)胞、MV4-11細(xì)胞 Hi5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JC細(xì)胞、SKCO1細(xì)胞、CEMx721.174.T2細(xì)胞 NS1-Ag 4/1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Meat Animal Research Center-145細(xì)胞、AMO-1細(xì)胞、ESC細(xì)胞 HPAF-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L Wnt-3A細(xì)胞、NCI-H2107細(xì)胞、HMC3細(xì)胞 VMM5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NuTu 19細(xì)胞、HCC9724細(xì)胞、EM3細(xì)胞 SKG-3a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TALL1細(xì)胞、NIT-1細(xì)胞、Hs 604.T細(xì)胞 CO115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK.MEL.5細(xì)胞、PECAPJ34細(xì)胞、MADB-106細(xì)胞 MGH-U1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML2細(xì)胞、IM-9細(xì)胞、GM02219C細(xì)胞 MFE280細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EBC1細(xì)胞、MG-63細(xì)胞、BaF3細(xì)胞 P31/FUJ Lymphoblastoid cells人急性單核白血病細(xì)胞系 HPAFII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UM-UC-1細(xì)胞、SKG-3a細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-85-1細(xì)胞 HUT-125細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL-92_1_7細(xì)胞、hTERT-RPE-1細(xì)胞、VeroE6細(xì)胞 B78細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI6666細(xì)胞、SW-1783細(xì)胞、ASH3細(xì)胞 DoTc2 4510細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO201細(xì)胞、SACC-83細(xì)胞、T-47-D細(xì)胞 E6-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRhK-4細(xì)胞、293 c18細(xì)胞、143 B細(xì)胞 H838細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:E.G7-OVA細(xì)胞、Hs 600.T細(xì)胞、AML-2細(xì)胞 H838細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:E.G7-OVA細(xì)胞、Hs 600.T細(xì)胞、AML-2細(xì)胞 BJA-B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3Ag1.2.3細(xì)胞、NE-1細(xì)胞、BC-020細(xì)胞 H125細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLM16細(xì)胞、LLC-WRC 256細(xì)胞、RPPVEC細(xì)胞 LoMeT-ccRcc細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RASMCs細(xì)胞、EoL-1細(xì)胞、OVCAR.5細(xì)胞 H774細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IAR 20細(xì)胞、C28/I2細(xì)胞、Functional Liver Cell-7細(xì)胞 OCILY-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-X63-Ag8-653細(xì)胞、WM 239A細(xì)胞、Cor L51細(xì)胞 BT 325細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCaP-37細(xì)胞、KNS-62細(xì)胞、DU-4475細(xì)胞 NCI-H2172細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pt K1細(xì)胞、NPC-TW 039細(xì)胞、Detroit 562細(xì)胞 MGH-U1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML2細(xì)胞、IM-9細(xì)胞、GM02219C細(xì)胞 NCI-H196細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIE-115細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-12T細(xì)胞、L615細(xì)胞 T-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CWR22-Rv1細(xì)胞、32D clone3細(xì)胞、SBC-5細(xì)胞 MFD-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAPC-4細(xì)胞、JHH-7細(xì)胞、MC3T3-E1 Subclone 24細(xì)胞 HMrSV5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL11細(xì)胞、NCIH1437細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-134-VI細(xì)胞 NCIH522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pa16C細(xì)胞、CAL 120細(xì)胞、OVCAR433細(xì)胞 SK-MEL-31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO cell clone K1細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-39細(xì)胞、PC 61.5.3細(xì)胞 SVG(P12)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BPH1細(xì)胞、NCI-SNU-886細(xì)胞、COLO320-DM細(xì)胞 HCMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C4-2B細(xì)胞、LAD-2細(xì)胞、Hs706T細(xì)胞 NCI-H1793細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sol8細(xì)胞、Colo-678細(xì)胞、H-2135細(xì)胞 COV-434細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1376細(xì)胞、PNT-1A細(xì)胞、B16BL6細(xì)胞 MNNG/HOS Clone F-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJSA1細(xì)胞、DHL-16細(xì)胞、GM02131A細(xì)胞 HIT T-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CORL23細(xì)胞、SGC 7901細(xì)胞、SK RC 20細(xì)胞 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