"EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細(xì)胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細(xì)胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 NCI-H1930細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCC Sup細(xì)胞、Hs695細(xì)胞、NCI-H1793細(xì)胞 KNS-42細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P-388D1細(xì)胞、mRMEC細(xì)胞、T47-D細(xì)胞 Mv 1 Lu (NBL-7)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCaP 37細(xì)胞、H-1944細(xì)胞、NCI-UMC-11細(xì)胞 細(xì)胞生長:懸浮 EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會出現(xiàn)變異,有時因寄贈、交換和購買,培養(yǎng)細(xì)胞從一個實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個實(shí)驗(yàn)室,的策略是進(jìn)行低溫保存。這對于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?,F(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細(xì)胞要快速融化,并直接加入完全生長培養(yǎng)基中。若細(xì)胞對凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml完全生長培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細(xì)胞/ml;培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時,更換新鮮的完全生長培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml完全生長培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞,并且進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞鋪板,細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細(xì)胞/ml。細(xì)胞的分化:一個成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個,可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細(xì)胞均來自一個受精卵細(xì)胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細(xì)胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,這個過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長不斷分裂的細(xì)胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細(xì)胞周期中G1期開始時一個確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,它們的基因表達(dá)和代謝活動各不相同。 細(xì)胞傳代方法:4 X 105 cells/mL and maintain at between 4 X 105 and 1 X 106 cells/mL.,每2-3天換液 HELA-GFP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:251MG細(xì)胞、NCI-128細(xì)胞、HuPT4細(xì)胞 EFM-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMES細(xì)胞、RD-ES細(xì)胞、HT-115細(xì)胞 SU-DHL-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-020細(xì)胞、Rat-2細(xì)胞、NCIH2170細(xì)胞 HCC1500細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OEC33細(xì)胞、HTR-8/SV neo細(xì)胞、H1417細(xì)胞 HCC-1359細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-159PT細(xì)胞、NIH:OVCAR-4細(xì)胞、Karpas-299細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞樣 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 NCTC929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OAW-42細(xì)胞、GM07404細(xì)胞、SK-N-BE(1)n細(xì)胞 NCI-747細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos-2G6-4C10細(xì)胞、CHG5細(xì)胞、FRO81-2細(xì)胞 SACC-LM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIEC6細(xì)胞、HCC-1187細(xì)胞、Tu-177細(xì)胞 HEI193細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DLD1細(xì)胞、138MG細(xì)胞、UMNSAH/DF-1細(xì)胞 SK-OV-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-239-A細(xì)胞、TCMK1細(xì)胞、NCIH2405細(xì)胞 Mv1Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63-Ag8.653細(xì)胞、KU-812細(xì)胞、BIU-87細(xì)胞 KMM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF12F細(xì)胞、RPMI 2650細(xì)胞、CCRFCEM細(xì)胞 Hep-3B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs445細(xì)胞、T24細(xì)胞、HOS/MNNG細(xì)胞 PBL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H35細(xì)胞、RAW 264.7細(xì)胞、MA-782細(xì)胞 LLC-WRC 256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuNS1細(xì)胞、HEEpiC細(xì)胞、MHCC-LM3細(xì)胞 EB2 Lymphoblastoid cells人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞系 HEK293A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK62a細(xì)胞、Panc 4.03細(xì)胞、L-540細(xì)胞 IAR 20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NG-108-15細(xì)胞、N9細(xì)胞、293 F細(xì)胞 HSC-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMC細(xì)胞、COLO 679細(xì)胞、SK-N-BE細(xì)胞 BALL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HepG2細(xì)胞、SACC-LM細(xì)胞、LCLC-103H細(xì)胞 OVCA432_Bast細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-A549細(xì)胞、130-T細(xì)胞、SW-1271細(xì)胞 MGH-U1 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