"SW1353 epithelioid cells人軟骨肉瘤細胞系 細胞背景資料:骨肉瘤;女性 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 MDA231-LM2-4175細胞系相關產(chǎn)品:CSQT-2細胞、Leukemia L1210細胞、HCT-FET細胞 QBI-293A細胞系相關產(chǎn)品:G401細胞、C33-A細胞、Hs729細胞 SR-786細胞系相關產(chǎn)品:OCI/AML-4細胞、EFM-192B細胞、SK-RC-52細胞 細胞生長:貼壁 SW1353 epithelioid cells人軟骨肉瘤細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞的凍存:為避免污染造成的損失,最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉(zhuǎn)化,需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前,細胞應該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基,成分可能如下:包含10%甘油的完全培養(yǎng)基;包含10%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基;50%細胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基或50%細胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基,一些普通的培養(yǎng)基成分可能是:50%細胞條件無血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有7.5%二甲基亞砜和10%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存:計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數(shù)生長期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細胞,使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細胞。以1×10(7)到5×10(7)細胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞,或者以0.5×10(7)到1×10(7)在無血清培養(yǎng)基中,再次懸浮細胞。分裝進凍存管,將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以1℃/分鐘進行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存:使用分離試劑從基層分離細胞,分離時盡可能溫和,使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中,再次懸浮分離細胞,確定有活力細胞數(shù)。以大約200g離心5分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細胞。以5×10(6)到1×10(6)細胞/ml密度,在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管,將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以1℃/分鐘進行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 H4-II-E細胞系相關產(chǎn)品:Hmy.2 CIR細胞、PANC 203細胞、624細胞 H-1238細胞系相關產(chǎn)品:ARH77細胞、Anip[973]細胞、THLE-3細胞 MD Anderson-Metastatic Breast-361細胞系相關產(chǎn)品:OCILY10細胞、RCC23細胞、CRFK細胞 EA hy 926細胞系相關產(chǎn)品:GM00637B細胞、SUDHL-6細胞、HS-68細胞 NCI-HUT-596細胞系相關產(chǎn)品:675T細胞、A 253細胞、CWR22Rv1細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 SW1353 epithelioid cells人軟骨肉瘤細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。 GES1細胞系相關產(chǎn)品:HEK293FT細胞、Hs832.Tc細胞、MG-HU-3細胞 BJAB-1細胞系相關產(chǎn)品:SF767細胞、SkMel31細胞、Hs739T細胞 BC-3-H-I細胞系相關產(chǎn)品:CHP126細胞、Lewis Lung細胞、NBL-3細胞 SW-1271細胞系相關產(chǎn)品:HeLa/S3細胞、HEK293T/17細胞、DLD 1細胞 T-47-D細胞系相關產(chǎn)品:BTI-TN5B1-4細胞、Panc_08_13細胞、KMST6細胞 NCIH2030細胞系相關產(chǎn)品:DoHH-2細胞、RH-30細胞、GP2-293細胞 8305-C細胞系相關產(chǎn)品:CDC/EU.HMEC-1細胞、TGHAVSMC細胞、MCF12F細胞 HCC202細胞系相關產(chǎn)品:NKM1細胞、WEHI 164 TC細胞、SUDHL16細胞 NCI-H2087細胞系相關產(chǎn)品:SW962細胞、2B4細胞、KYSE30細胞 ST細胞系相關產(chǎn)品:HGF-1細胞、THPI細胞、RGM-1細胞 SW1353 epithelioid cells人軟骨肉瘤細胞系 Hs729T細胞系相關產(chǎn)品:NIHOVCAR3細胞、EJ細胞、MDA361細胞 NCI.H226細胞系相關產(chǎn)品:HEC1-B細胞、5-8F細胞、NCI H508細胞 Renal Carcinoma細胞系相關產(chǎn)品:LNCaP subline C4-2細胞、H9c2細胞、Hs 888.T細胞 Pro-Lec1.3C細胞系相關產(chǎn)品:3T3 clone A31細胞、UACC 812細胞、NCI-H1770細胞 Rat 2細胞系相關產(chǎn)品:AR4IP細胞、TEV-1細胞、253J B-V細胞 Hs 766T細胞系相關產(chǎn)品:HRVEC細胞、MDA MB 436細胞、WM-266-4細胞 PANC 813細胞系相關產(chǎn)品:HCT GEO細胞、MESSADX5細胞、PM6細胞 QBI-HEK 293A細胞系相關產(chǎn)品:EU-2細胞、MN9D細胞、CHAGOK1細胞 SKO3細胞系相關產(chǎn)品:143 B細胞、NCIH460細胞、CV-1 in Origin Simian-7細胞 HDQP1細胞系相關產(chǎn)品:Tissue Culture-1細胞、HuP-T4細胞、Ect1/E6E7細胞 Hs-27細胞系相關產(chǎn)品:SKNBE2細胞、NTERA2-D1細胞、SNU5細胞 H-2085細胞系相關產(chǎn)品:BC-PAP細胞、GTL16細胞、NCTC 3960細胞 SBC5細胞系相關產(chǎn)品:NCI-SNU-C2A細胞、KLE細胞、RD細胞 Dami細胞系相關產(chǎn)品:H-1954細胞、SK-NMC細胞、U-138MG細胞 RPMI1788細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H1436細胞、UM-UC14細胞、NCI-H1436細胞 ECC-10細胞系相關產(chǎn)品:LICR-LON-HN6-R細胞、Z138細胞、MDA-MB436細胞 Neuro-2a細胞系相關產(chǎn)品:HBSMC細胞、IOSE80細胞、Madin Darby Bovine Kidney細胞 P30-OHKUBO細胞系相關產(chǎn)品:BALB/3T3 (clone A31)細胞、SW13細胞、Renal Carcinoma細胞 OVCA-432細胞系相關產(chǎn)品:MRC-5細胞、NCI-H209細胞、SCC90細胞 Medical Research Council cell strain-9細胞系相關產(chǎn)品:NCIH441細胞、T24(ECV304)細胞、H4-II-E-C3細胞 MRAEC細胞系相關產(chǎn)品:LNCaP C4-2B細胞、LS-123細胞、RAMSCs細胞 38C-13細胞系相關產(chǎn)品:MAVER細胞、HT-3細胞、U343細胞 HCAEC細胞系相關產(chǎn)品:NCIH522細胞、H.Ep.-2細胞、PLC細胞 BetaTC6細胞系相關產(chǎn)品:NIH-OVCAR-3細胞、Hs895.T細胞、A-172細胞 AR42J細胞系相關產(chǎn)品:COR-L88細胞、TI-73細胞、HeLa S 3細胞 CHP212細胞系相關產(chǎn)品:CTV1細胞、T-98細胞、Farage Original Line細胞 Walker/LLC-WRC256細胞系相關產(chǎn)品:INS1-E細胞、CL1-0細胞、Vero 76 clone E-6細胞 BC-020細胞系相關產(chǎn)品:C-8161細胞、Vero E6細胞、B-16細胞 MS-751細胞系相關產(chǎn)品:H-1184細胞、COLO.205細胞、H847細胞 FAT細胞系相關產(chǎn)品:Dunn LM8細胞、IPLB-SF 21AE細胞、H1650_CO細胞 8305C細胞系相關產(chǎn)品:MKN28細胞、NCI-H719細胞、SK-MEL2細胞 SKML-28細胞系相關產(chǎn)品:CT26.CL25細胞、TE32細胞、PG13細胞 KM932細胞系相關產(chǎn)品:T-24細胞、Caco-2細胞、HRC-99細胞 HEK293細胞系相關產(chǎn)品:U-343-MG細胞、HIMEC細胞、Murine Carcinoma-38細胞 LSECs細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H295細胞、QGY7701細胞、DHL10細胞 Panc-02細胞系相關產(chǎn)品:UM-UC3細胞、LC-2 ad細胞、MARC-145細胞 AU-565細胞系相關產(chǎn)品:LCLC-103H細胞、Clone 166細胞、Panc04.03細胞 NTC-200細胞系相關產(chǎn)品:Panc-05.04細胞、MDAMB-231細胞、K7M2 wt細胞 COLO-1細胞系相關產(chǎn)品:Hs 766T細胞、OACP4 C細胞、Hs-675-T細胞 HKC細胞系相關產(chǎn)品:SW-982細胞、PL9細胞、BL1339細胞 HBZY 1細胞系相關產(chǎn)品:HOS-MNNG細胞、HEK-293F細胞、REC1細胞 KB細胞系相關產(chǎn)品:T-ALL1細胞、H-2171細胞、SUM-159PT細胞 Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細胞系相關產(chǎn)品:H-676B細胞、Centre Antoine Lacassagne-148細胞、RIN-m 14B細胞 Calu-1細胞系相關產(chǎn)品:KYSE-140細胞、BCAP37細胞、NCI-BL2141細胞 CCD 841 CoTr細胞系相關產(chǎn)品:COLO-320HSR細胞、CHP212細胞、C3H-10T1/2細胞 HTSMC細胞系相關產(chǎn)品:LIM-1215細胞、Ej138細胞、HTori-3細胞 PANC0813細胞系相關產(chǎn)品:293c18細胞、P3/ag細胞、BRL-3A細胞 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