"hs 68 epithelioid cells男性正常龜頭細胞系 細胞背景資料:該細胞1969年由Owens RB建立。 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復(fù)蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 Swiss/3T3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Fetal Thymocyte-8810細胞、LL/2 (LLC1)細胞、NCI-H2085細胞 HO-8910細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2081細胞、LA-795細胞、SUM159PT細胞 U031細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL299細胞、NCIH1385細胞、CCF-STTG1細胞 細胞生長:貼壁 hs 68 epithelioid cells男性正常龜頭細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享:支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細菌高。細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達,又不能通過可視法對其進行檢測,而且它對細胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。組織細胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁,一般來講,對作用于細胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細胞傳代方法:1:2傳代 NTERA2-cloneD1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GL-261細胞、MB49細胞、SUNE 1細胞 SU-DHL6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuT78細胞、NCI-H661細胞、IOSE-29細胞 IHH-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PE CA PJ34細胞、CEM-C1細胞、L 132細胞 TK 10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC-116細胞、AG06814-N細胞、CAL851細胞 SW 837細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2122細胞、NCM-460細胞、Kasumi-1細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 hs 68 epithelioid cells男性正常龜頭細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導(dǎo)致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復(fù)蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 OVCAR.3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero C1008細胞、SKNEP1細胞、Madin Darby Canine Kidney細胞 KU-19-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MM1.S細胞、SK-NEP-1細胞、HT細胞 Walker/LLC-WRC256細胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS1-E細胞、CL1-0細胞、Vero 76 clone E-6細胞 X63Ag8.653細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT144mel細胞、Leydig細胞、SW-962細胞 WB F344細胞系相關(guān)產(chǎn)品:T-HSC細胞、LS-174T細胞、RPMI8226/S細胞 PM6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1694細胞、hEEC細胞、HCT116細胞 U-87MG ATCC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJ [Human fibroblast]細胞、SW 1222細胞、HT-1376細胞 Mel624細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH847細胞、CAL 148細胞、SK Mel 24細胞 H-520細胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGP-1細胞、UPCI-SCC090細胞、CPAE細胞 SW-982細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LADMAC細胞、C4I細胞、YD-38細胞 hs 68 epithelioid cells男性正常龜頭細胞系 MC3T3E1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc10.05細胞、RH7777細胞、UT7細胞 HPAFII細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UM-UC-1細胞、SKG-3a細胞、Centre Antoine Lacassagne-85-1細胞 NCI-H1623細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 320HSR細胞、HHUA細胞、ST486細胞 HBL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U2-OS細胞、VSMC細胞、D324細胞 Hs 578T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-AS細胞、F98細胞、WM 239-A細胞 PL9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-78細胞、CAKI1細胞、MDA-MB-231-GFP細胞 SW-1116細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL1細胞、Transformed Human Liver Epithelial-3細胞、MODE-K細胞 HPAF II細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD 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(NBL-4)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep3B細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-134-VI細胞、HHL5細胞 T98G細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RS4:11細胞、130T細胞、NSI/1-Ag4-1細胞 Hep G2/C3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa-229細胞、GM05887細胞、SK-MEL28細胞 EB-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rainbow Trout Embryo細胞、U251n細胞、CHO-S細胞 Ku812細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VK-2/E6E7細胞、HTh 74細胞、EFM192細胞 CNE-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPBALL細胞、SUSM1細胞、IA-LM細胞 HPAEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero細胞、FBHE細胞、SK-SH-SY5Y細胞 H-1436細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PNT1/A細胞、SUM-52-PE細胞、Hca-F細胞 HCPEpiC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PT-67細胞、NCIH2172細胞、C2-C12細胞 KPL-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1417細胞、SW626細胞、BMDC細胞 639V細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs695T細胞、OPM2細胞、SUDHL-4細胞 KU.812細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J-774A.1細胞、Hi-five細胞、HEK-293-H細胞 HH [Human lymphoma]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1184細胞、H-1882細胞、C2A細胞 MDA-134細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CV1細胞、OACP4C細胞、LLC細胞 H-1648細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR-3細胞、MLMEC細胞、CPA47細胞 M21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1385細胞、RKO細胞、SKCO 1細胞 SUM 190細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SV-HUC-1細胞、SH-SY5Y Parental細胞、HPAF-II/CD18細胞 DH 82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A549/DDP細胞、MEG01細胞、IMR 32細胞 HCC-2935細胞系相關(guān)產(chǎn)品:746T細胞、MOLT4細胞、253JBV細胞 COS7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BALB/3T3 cl. A31細胞、HR1K細胞、Vx2細胞 SEG-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1522細胞、CNLMG-B5537SKIN細胞、AR4-2J細胞 DU-145細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HRGEC細胞、Human Pancreatic Duct Epithelial細胞、Hx-147細胞 HConEpic細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero 76 clone E-6細胞、KP-N-RT細胞、NCIH929細胞 MES 23.5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C2A細胞、Mono Mac6細胞、P3/ag細胞 CORL51細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1299細胞、CF Pac1細胞、Hs746-T細胞 HCC1588細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-211細胞、MDA-kb2細胞、H-3255細胞 BEL7404細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Detroit562細胞、LNCaP FGC細胞、SACC83細胞 MDA-MB-134細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA432細胞、Tu212細胞、624-mel細胞 hs 68 epithelioid cells男性正常龜頭細胞系 KU19-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEPa2細胞、GalK1細胞、PLB-985細胞 COR-L105細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC1細胞、MOLM16細胞、beta-TC6細胞 ECC-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LICR-LON-HN6-R細胞、ATDC5細胞、SUDHL-4細胞 Walker/LLC-WRC256細胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS1-E細胞、U2OS細胞、TW 01細胞 "
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