β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒

中文名稱：β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒

英文名稱：In Situ β-galactosidase Staining Kit

產品規(guī)格：>100次

本試劑盒是一種用于細胞或組織β-半乳糖苷酶原位染色檢測的試劑盒。β-半乳糖苷酶是一種常用的報告基因分子，通過原位染色，在普通的光學顯微鏡下就可以用于檢測到β-半乳糖苷酶的表達。本試劑盒可以用于組織切片的染色，也可以用于培養(yǎng)細胞的染色。

的β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒，以X-Gal為底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會生成深藍色產物。從而在光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。

本試劑盒經過多方面的優(yōu)化，是同類產品中首創(chuàng)的能兼容普通的細胞培養(yǎng)用多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容導致的染色偏弱、染色效果不穩(wěn)定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯材質的耗材、容器或玻璃容器進行溶液的配制，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質的容器或耗材，否則可能會出現絮狀沉淀，影響實驗觀察。即使嚴格按照要求操作，也會在染色時間比較長的情況下，容易出現絮狀物沉淀(參考圖2)。本試劑盒經過多方面的優(yōu)化，對耗材或容器的材質無特殊要求，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不會產生沉淀或不溶物，使用更加便捷。


圖2.本試劑盒優(yōu)化前后的對比圖。優(yōu)化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質的材料如移液管、多孔板等會產生明顯的腐蝕(A圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖)；優(yōu)化后，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察也沒有任何異常情況(D圖)。

如果使用6孔板檢測，足夠測定100個樣品；使用24孔板測定，足夠測定400個樣品；使用96孔板測定，足夠測定1000個樣品。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數量視樣品的大小而定。對于普通切片的滴染足夠檢測100個樣品。

試劑盒組成：
  

保存條件：-20℃保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。

注意事項：
1．β-半乳糖苷酶染色固定液對人體有毒、有腐蝕性，操作時請?zhí)貏e小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
2．X-Gal溶液在-20℃或4℃保存會凍結，室溫或37℃水浴2-5分鐘并適當搖動即可完全融解。
3．β-半乳糖苷酶染色液B在剛剛溶解后會觀察到有沉淀，屬正?，F象，充分混勻或Vortex后，沉淀會全部溶解。作為常規(guī)，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解，并且混勻。
4．使用96孔板等多孔板進行檢測時，如果孵育過夜容易產生所謂的“邊緣效應”(edge effect)，即多孔板四周的孔由于和外界最直接接觸，易受外界環(huán)境影響，其中最明顯的是四周細胞培養(yǎng)孔的蒸發(fā)效應。邊緣效應會導致細胞生長不均勻、細胞分布不均一、培養(yǎng)液體積不一致、培養(yǎng)液中相關成分的濃度、pH值不一致。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應：避免孵育過長時間，以避免蒸發(fā)等帶來的邊緣效應；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當溶液；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當溶液；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發(fā)蓋；在實驗設計時，實驗樣品進行隨機分配，不要將某一組樣品固定放在某個位置而引入可能的系統(tǒng)性誤差。
5．需自備PBS。
6．本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
7．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

對于培養(yǎng)細胞樣品：
1.轉染細胞：采取適當的方法將表達β-半乳糖苷酶的質粒轉染細胞。轉染細胞24-48小時后可以使用本試劑盒進行原位染色，檢測β-半乳糖苷酶的表達。
2.對于6孔板，吸除細胞培養(yǎng)液，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定10分鐘。對于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進行操作。
3.吸除細胞固定液，用PBS洗滌細胞3次，每次3分鐘。
4.吸除PBS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制如下：
  

5.37℃孵育20分鐘至2小時，或更長時間，直至部分細胞的顏色變藍。如果孵育時間較長，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)。
6.普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數天。如果用于計算轉染效率，轉染效率＝染色陽性細胞數/總細胞數×100%。

對于組織切片或非常小的組織塊：
1.對于組織切片或非常小的組織塊，加入適當體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于10分鐘。對于小的組織塊，固定時間應該適當延長。
2.用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時間還要適當延長。
3.吸除PBS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制參照上面對于培養(yǎng)細胞樣品的第4步。
4.37℃孵育20分鐘至2小時，或更長時間，直至部分細胞的顏色變藍。如果孵育時間較長，可以用parafilm或保鮮膜封住放置組織的容器，以防止蒸發(fā)。
5.吸除染色工作液，用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時間還要相應延長。
6.普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數天。

特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！