β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒

中文名稱：β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒

英文名稱：In Situ β-galactosidase Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格：>100次

本試劑盒是一種用于細(xì)胞或組織β-半乳糖苷酶原位染色檢測的試劑盒。β-半乳糖苷酶是一種常用的報告基因分子，通過原位染色，在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以用于檢測到β-半乳糖苷酶的表達(dá)。本試劑盒可以用于組織切片的染色，也可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的染色。

的β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒，以X-Gal為底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會生成深藍(lán)色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。

本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，是同類產(chǎn)品中首創(chuàng)的能兼容普通的細(xì)胞培養(yǎng)用多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質(zhì)耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容導(dǎo)致的染色偏弱、染色效果不穩(wěn)定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯材質(zhì)的耗材、容器或玻璃容器進(jìn)行溶液的配制，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質(zhì)的容器或耗材，否則可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實(shí)驗(yàn)觀察。即使嚴(yán)格按照要求操作，也會在染色時間比較長的情況下，容易出現(xiàn)絮狀物沉淀(參考圖2)。本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，對耗材或容器的材質(zhì)無特殊要求，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不會產(chǎn)生沉淀或不溶物，使用更加便捷。


圖2.本試劑盒優(yōu)化前后的對比圖。優(yōu)化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料如移液管、多孔板等會產(chǎn)生明顯的腐蝕(A圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖)；優(yōu)化后，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察也沒有任何異常情況(D圖)。

如果使用6孔板檢測，足夠測定100個樣品；使用24孔板測定，足夠測定400個樣品；使用96孔板測定，足夠測定1000個樣品。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定。對于普通切片的滴染足夠檢測100個樣品。

試劑盒組成：
  

保存條件：-20℃保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。

注意事項(xiàng)：
1．β-半乳糖苷酶染色固定液對人體有毒、有腐蝕性，操作時請?zhí)貏e小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
2．X-Gal溶液在-20℃或4℃保存會凍結(jié)，室溫或37℃水浴2-5分鐘并適當(dāng)搖動即可完全融解。
3．β-半乳糖苷酶染色液B在剛剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀，屬正常現(xiàn)象，充分混勻或Vortex后，沉淀會全部溶解。作為常規(guī)，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解，并且混勻。
4．使用96孔板等多孔板進(jìn)行檢測時，如果孵育過夜容易產(chǎn)生所謂的“邊緣效應(yīng)”(edge effect)，即多孔板四周的孔由于和外界最直接接觸，易受外界環(huán)境影響，其中最明顯的是四周細(xì)胞培養(yǎng)孔的蒸發(fā)效應(yīng)。邊緣效應(yīng)會導(dǎo)致細(xì)胞生長不均勻、細(xì)胞分布不均一、培養(yǎng)液體積不一致、培養(yǎng)液中相關(guān)成分的濃度、pH值不一致。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應(yīng)：避免孵育過長時間，以避免蒸發(fā)等帶來的邊緣效應(yīng)；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當(dāng)溶液；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當(dāng)溶液；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發(fā)蓋；在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時，實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行隨機(jī)分配，不要將某一組樣品固定放在某個位置而引入可能的系統(tǒng)性誤差。
5．需自備PBS。
6．本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
7．為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：

對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：采取適當(dāng)?shù)姆椒▽⒈磉_(dá)β-半乳糖苷酶的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞。轉(zhuǎn)染細(xì)胞24-48小時后可以使用本試劑盒進(jìn)行原位染色，檢測β-半乳糖苷酶的表達(dá)。
2.對于6孔板，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定10分鐘。對于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。
3.吸除細(xì)胞固定液，用PBS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。
4.吸除PBS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制如下：
  

5.37℃孵育20分鐘至2小時，或更長時間，直至部分細(xì)胞的顏色變藍(lán)。如果孵育時間較長，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)。
6.普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計(jì)數(shù)，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。如果用于計(jì)算轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染效率＝染色陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

對于組織切片或非常小的組織塊：
1.對于組織切片或非常小的組織塊，加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于10分鐘。對于小的組織塊，固定時間應(yīng)該適當(dāng)延長。
2.用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時間還要適當(dāng)延長。
3.吸除PBS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制參照上面對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品的第4步。
4.37℃孵育20分鐘至2小時，或更長時間，直至部分細(xì)胞的顏色變藍(lán)。如果孵育時間較長，可以用parafilm或保鮮膜封住放置組織的容器，以防止蒸發(fā)。
5.吸除染色工作液，用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時間還要相應(yīng)延長。
6.普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！