"HT-1080 epithelioid cells人纖維肉瘤細胞系 細胞背景資料:該細胞源自一名35歲患有纖維肉瘤的白人男性的結(jié)締組織;ras+。 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 CCLP-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW-039細胞、CORL51細胞、A20細胞 rHSC-99細胞系相關(guān)產(chǎn)品:624細胞、Onda 11細胞、Panc327細胞 HK-2 [Human kidney]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:University of Arizona Cell Culture-812細胞、KBM-7/Hap8細胞、H-522細胞 細胞生長:貼壁 HT-1080 epithelioid cells人纖維肉瘤細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細胞和你一樣,消化下來也是一團的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細胞生長挺快,那么細胞的增殖能力應該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能:一、細胞消化后吹打不均勻,造成細胞成團生長:二、細胞細化太過,細胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細胞聚團生長。解決辦法:根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化,將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。我談談個人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細胞傳代方法:1:4-1:8傳代;2-3天換液1次。 NCIH82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT55細胞、NTera 2細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細胞 BaF3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECV304細胞、NCIH526細胞、H-1437細胞 RC92A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1648細胞、CCC-HEH-2細胞、HUT 125細胞 SKMEL5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C57 Mouse Tumor 93細胞、PC-3M-1E8細胞、293-EBNA1細胞 HOS(TE85)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HAVSMC細胞、NCI-841細胞、NCIH2347細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 HT-1080 epithelioid cells人纖維肉瘤細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:上皮樣 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。 H-1373細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCO細胞、CHP 212細胞、MCFs細胞 LAD-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:293FT細胞、PLC-PRF-5細胞、TB1 Lu細胞 HuT 102細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAKI 1細胞、GM15452細胞、SW954細胞 C17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-453細胞、SK-MEL-31細胞、Tn5B1-4細胞 H-520細胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGP-1細胞、UPCI-SCC090細胞、CPAE細胞 B16 melanoma細胞系相關(guān)產(chǎn)品:As-PC1細胞、End1/E6E7細胞、H889細胞 OV1-P細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H740細胞、SK-ChA-1細胞、UPCI:SCC154細胞 OSC-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE2_C細胞、MDA 1386細胞、CL 1-0細胞 LS 180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1080細胞、MODE-K細胞、H-661細胞 EJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hepa-RG細胞、SNT8細胞、CORL105細胞 HT-1080 epithelioid cells人纖維肉瘤細胞系 Hs445細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC-39細胞、CAL85-1細胞、CEM-C1細胞 BC3H1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:T9細胞、OC 316細胞、NS-20Y細胞 NCI-SNU-119細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRK clone 49F細胞、MDAMB134細胞、H-2172細胞 RWPE2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細胞、DMS 153細胞、SCLC21H細胞 CG4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PaTu 8988s細胞、PLC/PRF/5細胞、HCC1954-BL細胞 H920細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HG2855細胞、SPCA-1細胞、MA-c細胞 H920細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HG2855細胞、SPCA-1細胞、MA-c細胞 H22細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 70細胞、Y3Ag1.2.3細胞、Glioma 261細胞 Hs 766T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HRVEC細胞、MDA MB 436細胞、WM-266-4細胞 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A.7R.1細胞、MB39細胞、H295R-S1細胞 B16BL6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEI193細胞、Rat Basophilic Leukemia-1細胞、MSF細胞 U-118 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DH82細胞、NTHY-ORI3.1細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細胞 SF126細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMH-2細胞、MCA 205細胞、MKN 7細胞 OKT3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TNC-1B12B4細胞、Experimental Mammary Tumour-6細胞、343 MG細胞 Gejiu Lung Carcinoma-82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1395細胞、87 MG細胞、OCILY-3細胞 SJRH 30細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H498細胞、GA-10(Clone 4)細胞、HVSMC細胞 UM-UC-14細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CF-1 MEF細胞、GL261細胞、ZYM-DIEC02細胞 SUDHL-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF-10 Attached細胞、University of Michigan-Renal Carcinoma-2細胞、RGC-5細胞 HR8348細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL10細胞、LS174T細胞、DMS153細胞 NCI.H226細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC1-B細胞、5-8F細胞、NCI H508細胞 253J細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM3569細胞、Mouse Podocyte Clone-5細胞、RT4P細胞 HEK-AD 293細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H184A1細胞、M059K細胞、CNLMG-B5537SKIN細胞 KMBC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MKN-28細胞、TE 85 ClF-5細胞、Neukoplast細胞 C32 mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSA-DX5細胞、C1R細胞、NGEC細胞 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