Alexa Fluor 488/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

中文名稱：Alexa Fluor 488/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

英文名稱：Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。
  細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對(duì)PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所獨(dú)特的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過性熒光染料碘化丙啶不能通過完整的活細(xì)胞，但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。

試劑盒組成：

注意事項(xiàng)：
1、消化細(xì)胞時(shí)不能用含EDTA的胰酶。
2、本試劑盒需使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。
3、需自備PBS和去離子水。
4、熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
5、PI對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
6、請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

操作步驟：

1、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a．對(duì)于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。
b．對(duì)于懸浮細(xì)胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。

2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。
4、取 100μl的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。
6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細(xì)胞儀(FACS)分析。

實(shí)驗(yàn)圖例：

Jurkat細(xì)胞用順鉑誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜
儲(chǔ)存條件：2～8℃，避光保存

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！