"VMRC-RCZ epithelioid cells人腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識(shí),在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對(duì)細(xì)胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對(duì)一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會(huì)比較大,就會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個(gè)說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 16HBE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC38細(xì)胞、RASMC細(xì)胞、SNB.19細(xì)胞 SMMC7721細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTLA4Ig-24細(xì)胞、C-6細(xì)胞、GM07404細(xì)胞 C3H/10T1/2-clone8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSF細(xì)胞、SW-962細(xì)胞、NSC-34細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 VMRC-RCZ epithelioid cells人腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長(zhǎng)期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異,有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購買,培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,的策略是進(jìn)行低溫保存。這對(duì)于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?,F(xiàn)簡(jiǎn)要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長(zhǎng)期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細(xì)胞要快速融化,并直接加入完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。若細(xì)胞對(duì)凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細(xì)胞/ml;培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時(shí),更換新鮮的完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞,并且進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞鋪板,細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細(xì)胞/ml。細(xì)胞的分化:一個(gè)成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個(gè),可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細(xì)胞均來自一個(gè)受精卵細(xì)胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細(xì)胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,這個(gè)過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長(zhǎng)不斷分裂的細(xì)胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細(xì)胞周期中G1期開始時(shí)一個(gè)確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長(zhǎng)分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,它們的基因表達(dá)和代謝活動(dòng)各不相同。 細(xì)胞傳代方法:1:6傳代 SU-DHL-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CII細(xì)胞、HMrSV5細(xì)胞、MCA38細(xì)胞 LS-174T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H4-II-EC3細(xì)胞、NCIH1869細(xì)胞、SKCol1細(xì)胞 Lu99A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16-F1細(xì)胞、Renal Carcinoma細(xì)胞、MBT2細(xì)胞 LAPC-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSA Dx5細(xì)胞、COR-L51細(xì)胞、B95.8細(xì)胞 AMJ2-C8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ANA1細(xì)胞、CHO K1細(xì)胞、SGC 7901細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 VMRC-RCZ epithelioid cells人腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動(dòng)作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時(shí)間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時(shí)候是傳代的原因;3)有時(shí)間的話,需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,不會(huì)臨時(shí)要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時(shí)間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時(shí)間,也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對(duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無菌操作,多噴噴酒精,要是對(duì)滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè);4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺(tái)是用完就開;6)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 HEL 299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2085細(xì)胞、MM.1S細(xì)胞、L-5178-Y細(xì)胞 MES-13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OSK-1細(xì)胞、CTLL(2)細(xì)胞、Calu3細(xì)胞 COR-L 105細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP212細(xì)胞、MDCKII細(xì)胞、HCCLM3細(xì)胞 PC 61.5.3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:alpha TC1 clone 6細(xì)胞、SK-MEL-MeWo細(xì)胞、U-251-MG細(xì)胞 MRCV細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H524細(xì)胞、BEP2D細(xì)胞、D-283細(xì)胞 38C13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:YH細(xì)胞、P31-FUJ細(xì)胞、Tn5 B1-4細(xì)胞 D-283細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NP69細(xì)胞、NCIH2023細(xì)胞、Vero-E6細(xì)胞 HT-144細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RMC-1細(xì)胞、SU-DH-L5細(xì)胞、Line 522細(xì)胞 Panc 8.13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-3H-1細(xì)胞、TOV-112D細(xì)胞、Medical Research Council cell strain-5細(xì)胞 LTEP-sm 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mono-Mac-6細(xì)胞、UPCI-SCC-090細(xì)胞、SNU-475細(xì)胞 VMRC-RCZ epithelioid cells人腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 alpha TC1-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Namalva細(xì)胞、H-1688細(xì)胞、NCIH2228細(xì)胞 RGC-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16F0細(xì)胞、Human Epidermoid carcinoma #2細(xì)胞、A 72細(xì)胞 HTSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LIM-1215細(xì)胞、Ej138細(xì)胞、HTori-3細(xì)胞 HS-766T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-1353細(xì)胞、NCI-H2085細(xì)胞、C32r細(xì)胞 NCI-H102細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KHYG1細(xì)胞、B/C3T3細(xì)胞、WIL2 S細(xì)胞 BOWES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T 24細(xì)胞、MDA 435細(xì)胞、3T3-A31細(xì)胞 BOWES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T 24細(xì)胞、MDA 435細(xì)胞、3T3-A31細(xì)胞 NIE 115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16-F10-BL6細(xì)胞、Bac1 2F5細(xì)胞、NCIH1395細(xì)胞 MCA-205細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-293 c18細(xì)胞、NCI-SNU-1040細(xì)胞、Nb2a細(xì)胞 P3-NS1/1Ag 4.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SIRC細(xì)胞、VERO C 1008細(xì)胞、H-2122細(xì)胞 SJSA-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PECAPJ34細(xì)胞、HAC-84細(xì)胞、MDA.MB.435細(xì)胞 NCIH1417細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUP-T1細(xì)胞、E.L.4細(xì)胞、Panc 2.03細(xì)胞 PE/CA-PJ34 (clone C12)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLT 4細(xì)胞、Swiss-3T3細(xì)胞、H-2087細(xì)胞 PA-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Becker細(xì)胞、NUGC-2細(xì)胞、NCIH1819細(xì)胞 SNU-16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:2E8細(xì)胞、JurkatE6-1細(xì)胞、X63-Ag8.653細(xì)胞 Nthy-ori 3.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL 1-5細(xì)胞、LLC-PK(1)細(xì)胞、IPEC1細(xì)胞 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TNC1細(xì)胞、SU86.86細(xì)胞、H1819細(xì)胞 NCIH244細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LIPF155C細(xì)胞、MF2059細(xì)胞、EJ細(xì)胞 UMRC2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D/cl3細(xì)胞、Malme3M細(xì)胞、HBZY-1細(xì)胞 MDAPCa-2b細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOV-112D細(xì)胞、U-373MG細(xì)胞、HS-683細(xì)胞 MC 116細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM06141細(xì)胞、KFB細(xì)胞、MH-S細(xì)胞 RCK-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:University of Arizona Cell Culture-893細(xì)胞、WC00079細(xì)胞、RPMI 7666細(xì)胞 VP 267細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細(xì)胞、ELD-1細(xì)胞、GM03190細(xì)胞 MAVER1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-761細(xì)胞、HuNS1細(xì)胞、FF-WT-BJ細(xì)胞 UM-RC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PNEC30細(xì)胞、B95.8細(xì)胞、Hs832T細(xì)胞 VMRC-RCZ epithelioid cells人腎細(xì)胞癌細(xì)胞系 NBL-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU 812F細(xì)胞、M14細(xì)胞、Highly Aggressively Proliferating Immortalized細(xì)胞 KYSE-450細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHHCALL2細(xì)胞、SF-763細(xì)胞、MFM223細(xì)胞 D10.G4.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP-126細(xì)胞、GM07404A細(xì)胞、NCI-SNU-216細(xì)胞 COR-L 105細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP212細(xì)胞、CHL細(xì)胞、67NR細(xì)胞 "
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