"Capan-2 epithelioid cells人胰腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 貼壁消化難題:1,先用PBS 把細(xì)胞洗兩遍,使瓶內(nèi)沒有血清了,減少對胰酶的中和,然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右,放在37度,然后可以在細(xì)胞有些消化下來時,拿著瓶口,運用手腕的力量輕輕震蕩瓶內(nèi)液體,這樣細(xì)胞很快就下來了,還不需要吹打,分散也均勻;2,成團(tuán)、絮狀:消化液里加入edta可以減少細(xì)胞成團(tuán)的現(xiàn)象,血清可以終止胰酶的作用,如果是進(jìn)口血清的話也能終止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉,也可以不倒,直接加血清終止,如果消化液中加入了edta的話,就要將消化液倒干凈,如果細(xì)胞貼壁要求不是很嚴(yán)格的話,一般不需要進(jìn)行離心。鼻咽癌細(xì)胞的貼壁能力很強(qiáng),用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗滌時要洗凈殘余的培養(yǎng)基,加入胰酶后在培養(yǎng)箱中消化(避免細(xì)胞室溫下受損以及在此溫度時胰酶活性最強(qiáng))至細(xì)胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細(xì)胞脫落(有流下來的趨勢),隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細(xì)胞很多且需要大量細(xì)胞實驗,則不能棄去胰酶),加入培養(yǎng)基仔細(xì)吹打(不能用無血清培養(yǎng)基或者PBS替代,否則細(xì)胞聚集成團(tuán)塊或絮狀)。一般我都離心一次棄去上清(去除殘留的胰酶及漂浮的死細(xì)胞或細(xì)胞碎片);消化過度:馬上用培養(yǎng)基中和,用吸管吹打細(xì)胞,收集全部的細(xì)胞到以無菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清,用全培重懸,換新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng),狀態(tài)不好的細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中會死亡脫落,在換液的時候可以清除掉! IPLB-SF 21AE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKO3細(xì)胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2細(xì)胞、HCC-2108細(xì)胞 LIM-1215細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC0327細(xì)胞、CEMx721.174.T2細(xì)胞、GM00637F細(xì)胞 AtT-20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1436細(xì)胞、HConEpic細(xì)胞、A-253細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 Capan-2 epithelioid cells人胰腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細(xì)胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細(xì)胞生長挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長:二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細(xì)胞聚團(tuán)生長。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:4傳代,2-3天換液1次。 SCC154細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Plaepi 34細(xì)胞、VM-CUB1細(xì)胞、BHT101細(xì)胞 Madin Darby Canine Kidney細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M20 [Human melanoma]細(xì)胞、SK-MEL5細(xì)胞、TM-4細(xì)胞 hTERT-HME-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293-EBNA細(xì)胞、HGF-1細(xì)胞、KOPN-8細(xì)胞 BHK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TEC細(xì)胞、I90細(xì)胞、H2085細(xì)胞 TOV-112D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECGI10細(xì)胞、HEK293-H細(xì)胞、Hs68細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Capan-2 epithelioid cells人胰腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:多邊形 細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項:1)如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細(xì)胞即時離心,加15%血清的完全培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請及時聯(lián)系實驗室技術(shù)人員會跟進(jìn)解決;2)貼壁細(xì)胞生長緩慢;適當(dāng)提高血清濃度(最高不能超過20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長密度,考慮胰酶消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng);3)生長不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 RASMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-Ly8細(xì)胞、TPC-1細(xì)胞、WSU-DLCL-2細(xì)胞 HCC 38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCTC1469細(xì)胞、Ku812細(xì)胞、NCI-H2171細(xì)胞 A204細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuT 102細(xì)胞、KY-270細(xì)胞、TK10細(xì)胞 FD-LSC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DI-TNC1細(xì)胞、DK-MG細(xì)胞、C127細(xì)胞 Nakata-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2172細(xì)胞、JVM-2細(xì)胞、NCIADRRES細(xì)胞 Fetal Human Colon細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM04154細(xì)胞、PBMC細(xì)胞、SR786細(xì)胞 MN 60細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H719細(xì)胞、639-V細(xì)胞、MZCRC1細(xì)胞 NBL-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RL952細(xì)胞、H-2085細(xì)胞、WSUDLCL2細(xì)胞 SW 1463細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC202細(xì)胞、H-345細(xì)胞、GT38細(xì)胞 CV-1 in Origin Simian-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF-7/ADR細(xì)胞、U937細(xì)胞、Vero C1008細(xì)胞 Capan-2 epithelioid cells人胰腺癌細(xì)胞系 BCaP 37細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA-N-1細(xì)胞、PC615.3細(xì)胞、AG06814-N細(xì)胞 hESC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCAP37細(xì)胞、TE12細(xì)胞、174xCEM.T2細(xì)胞 H9c2(2-1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE296細(xì)胞、PLCPRF5細(xì)胞、HCC0044細(xì)胞 H-441細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:769-P細(xì)胞、OVCAR 5細(xì)胞、SUM-190PT細(xì)胞 Bowes melanoma cells細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1187細(xì)胞、Panc327細(xì)胞、QGY-7701細(xì)胞 CEM C7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW 039細(xì)胞、A2008細(xì)胞、BeWo細(xì)胞 CEM C7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW 039細(xì)胞、A2008細(xì)胞、BeWo細(xì)胞 NCI-H220細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-1A細(xì)胞、WM 239細(xì)胞、MUTZ1細(xì)胞 DV-90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Eca-109細(xì)胞、Wayne State University-Head and Neck 13細(xì)胞、Duck embryo細(xì)胞 LS-411N細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:N-87細(xì)胞、H1648細(xì)胞、MESSA細(xì)胞 B6Tert-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-0細(xì)胞、EL4細(xì)胞、SNT8細(xì)胞 IOSE80細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H69C細(xì)胞、Jurkat E6-1細(xì)胞、MGECs細(xì)胞 IR 983F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-231 #4175細(xì)胞、Detroit-562細(xì)胞、HCT GEO細(xì)胞 Centre Antoine Lacassagne-33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Det. 562細(xì)胞、MV522細(xì)胞、MAC1細(xì)胞 SP-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FBHE細(xì)胞、U-226AR1細(xì)胞、BNL 1ME A.7R.1細(xì)胞 MCF-7B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jurkat 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