"NCI-H2286 epithelioid cells人肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細(xì)胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細(xì)胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個(gè)說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 Fortner's melanotic melanoma #3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C4I細(xì)胞、AR4-IP細(xì)胞、NCI-H2347細(xì)胞 HO-8910PM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T6細(xì)胞、TYKnu細(xì)胞、T98G細(xì)胞 RASMCs細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U2932細(xì)胞、JIMT1細(xì)胞、SKNBE2C細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 NCI-H2286 epithelioid cells人肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 冷凍細(xì)胞解凍程序:依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒?yàn)需要,必須有所不同時(shí),務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細(xì)胞適應(yīng)后,方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清),對細(xì)胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37°C水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)?。保癿l培養(yǎng)基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25或T75flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對絕大多數(shù)細(xì)胞而言,1%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO,不會對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5-10ml培養(yǎng)基中,離心300xg(約1000rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細(xì)胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:4傳代;每周換液2次。 CHP212細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTV1細(xì)胞、T-98細(xì)胞、Farage Original Line細(xì)胞 McA-RH 8994細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-375細(xì)胞、Baby Hamster Kidney-21細(xì)胞、SCL II細(xì)胞 IOSE-Van細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VM Cub 1細(xì)胞、Potorous tridactylus Kidney 1細(xì)胞、HMO6細(xì)胞 SJSA-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PECAPJ34細(xì)胞、HAC-84細(xì)胞、MDA.MB.435細(xì)胞 Tu 212細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-187細(xì)胞、769P細(xì)胞、ssMCF7細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 NCI-H2286 epithelioid cells人肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:橢圓形 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動(dòng)作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時(shí)間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時(shí)候是傳代的原因;3)有時(shí)間的話,需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線,不會臨時(shí)要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時(shí)間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時(shí)間,也不會耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 IPEC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3 (Jiyoye)細(xì)胞、CCRF/CEM/0細(xì)胞、SKNO1細(xì)胞 MC57G細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTR8svn細(xì)胞、MIA Paca2細(xì)胞、HT144細(xì)胞 BALB/c 3T3 clone A31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SVHUC細(xì)胞、SUM-159細(xì)胞、H-1573細(xì)胞 MV4;11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Transformed Human Liver Epithelial-2細(xì)胞、LICR-HN6細(xì)胞、PA1細(xì)胞 HSC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 900細(xì)胞、AR42J細(xì)胞、H-510A細(xì)胞 TW 01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A20細(xì)胞、ECC-1細(xì)胞、SC細(xì)胞 MDA-175細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tn-5細(xì)胞、KY180細(xì)胞、M4e細(xì)胞 WPMY-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:8226細(xì)胞、K7M2-WT細(xì)胞、VM Cub 1細(xì)胞 U118-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SV-HUC細(xì)胞、brain-derived Endothelial cells.3細(xì)胞、GH 3細(xì)胞 KRC-Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Foreskin Fibroblast細(xì)胞、EAC細(xì)胞、Y3M細(xì)胞 NCI-H2286 epithelioid cells人肺癌細(xì)胞系 TCCSUP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DiFi細(xì)胞、FOX-NY細(xì)胞、KYSE-70細(xì)胞 H2195細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-449細(xì)胞、COLO679細(xì)胞、NCI H716細(xì)胞 Hs 766.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH838細(xì)胞、HPMC細(xì)胞、HT 1376.T細(xì)胞 NCCIT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-929細(xì)胞、Ca Ski細(xì)胞、NPC-TW01細(xì)胞 H-676細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:X63-Ag 8.6.5.3細(xì)胞、Hs742T細(xì)胞、H1238細(xì)胞 McCoy細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1373細(xì)胞、HAVSMC細(xì)胞、CA-46細(xì)胞 McCoy細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1373細(xì)胞、HAVSMC細(xì)胞、CA-46細(xì)胞 P3HR1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU119細(xì)胞、KYSE 450細(xì)胞、Clone 166細(xì)胞 Tn-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHCC97H細(xì)胞、AG06814-M細(xì)胞、16-HBE細(xì)胞 ARO-81細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT-26細(xì)胞、RCC4細(xì)胞、SK-N-BE(1)細(xì)胞 MDCC MSB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLA-144細(xì)胞、DoTc2-4510細(xì)胞、Porcine Kidney-13細(xì)胞 COC1/CDDP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA RO-81A-1細(xì)胞、IFRS1細(xì)胞、DHL-6細(xì)胞 OCI-Ly10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIN-m 14B細(xì)胞、Hs 578T細(xì)胞、P388.D1細(xì)胞 NIH-OVCAR-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:251 MG細(xì)胞、Mono-Mac-6細(xì)胞、High-5細(xì)胞 SK-UT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-14細(xì)胞、3-LL細(xì)胞、HPAEpiC細(xì)胞 MV4;11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Transformed Human Liver Epithelial-2細(xì)胞、LICR-HN6細(xì)胞、PA1細(xì)胞 CMT.64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mv.1.Lu細(xì)胞、NCI-H2135細(xì)胞、Mel-RM細(xì)胞 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