"NCI-H1573 epithelioid cells人肺癌腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞傳代培養(yǎng)實驗:體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞,并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后,由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭,將培養(yǎng)的細(xì)胞分散,從容器中取出,以1:2或1:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng),即為傳代培養(yǎng);細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中,細(xì)胞培增3~6次。細(xì)胞傳代后,一般經(jīng)過三個階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/100個細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細(xì)胞可達(dá)3~5%;細(xì)胞接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力時期,稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),適宜進(jìn)行各種試驗。實驗步驟:1.將長成的培養(yǎng)細(xì)胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,在超凈工作臺中倒掉瓶內(nèi)的培養(yǎng)液,加入少許消化液。(以液面蓋住細(xì)胞為宜),靜置5~10分鐘。2.在倒置鏡下觀察被消化的細(xì)胞,如果細(xì)胞變圓,相互之間不再連接成片,這時應(yīng)立即在超凈臺中將消化液倒掉,加入3~5ml新鮮培養(yǎng)液,吹打,制成細(xì)胞懸液。3.將細(xì)胞懸液吸出2ml左右,加到另一個培養(yǎng)瓶中并向每個瓶中分別加3ml左右培養(yǎng)液,蓋好瓶塞,送回二氧化碳培養(yǎng)箱中,繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。一般情況,傳代后的細(xì)胞在2小時左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上,2~4天就可在瓶內(nèi)形成單層,需要再次進(jìn)行傳代。 U-373 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-132細(xì)胞、Huh7.5.1細(xì)胞、GS9L細(xì)胞 Kasumi-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1623細(xì)胞、HL-60 Clone 15細(xì)胞、NCI-H1155細(xì)胞 HCFB(HCF)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI-231細(xì)胞、MG63細(xì)胞、OVCAR 420細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 NCI-H1573 epithelioid cells人肺癌腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細(xì)胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細(xì)胞生長挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長:二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時沒有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代,每周2-3次。 SJSA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L2細(xì)胞、CL34細(xì)胞、SHG44細(xì)胞 Normal Rat, August 3, 1983細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HL-60 clone15細(xì)胞、Rat 1細(xì)胞、HOK細(xì)胞 P30/0HK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMUC3細(xì)胞、H2107細(xì)胞、293 Ad5細(xì)胞 IMR90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Natural Killer-92細(xì)胞、Line 522細(xì)胞、COLO684細(xì)胞 H-2052細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM149-PT細(xì)胞、SCL II細(xì)胞、Hs 863.T細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 NCI-H1573 epithelioid cells人肺癌腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 細(xì)胞凍存的步驟:1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘);2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為5×106~1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來選擇;3)將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中,每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù));4)將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中,-80℃冰箱過夜。;如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐;5)細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。 Hs888 Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NE-4C細(xì)胞、NTERA-2 cl.D1細(xì)胞、Ca9-22細(xì)胞 KLM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPE1細(xì)胞、KALS1細(xì)胞、MEL細(xì)胞 CCD 841 CoTr細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-320HSR細(xì)胞、CHP212細(xì)胞、C3H-10T1/2細(xì)胞 SK-NSH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COV-362細(xì)胞、HCC 38細(xì)胞、C4-1細(xì)胞 HDF-a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-330細(xì)胞、HCC-38細(xì)胞、MILE SVEN 1細(xì)胞 RCC-10RGB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caco-2細(xì)胞、HCC0038細(xì)胞、NHLF細(xì)胞 Human Embryo Lung-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1437細(xì)胞、SKNBE(1)細(xì)胞、TKB-1細(xì)胞 CTX TNA2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB-6 Cl 30細(xì)胞、USMC細(xì)胞、C-32細(xì)胞 NTERA2D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MARC145細(xì)胞、MGH-U3細(xì)胞、H2195細(xì)胞 NCI-A549細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M14-MEL細(xì)胞、AdHek細(xì)胞、U266 Bl細(xì)胞 NCI-H1573 epithelioid cells人肺癌腺癌細(xì)胞系 ETCC-007細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL-92-1-7細(xì)胞、UT-7細(xì)胞、HCC1187細(xì)胞 U87MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OE-19細(xì)胞、EFM-192C細(xì)胞、BHK 21細(xì)胞 4-1st細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-5細(xì)胞、HL 60細(xì)胞、NCI H548細(xì)胞 H1792細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IM9細(xì)胞、Caco-2BBe細(xì)胞、MRC-V細(xì)胞 H2135細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1143細(xì)胞、Pa14C細(xì)胞、OCI-Ly19細(xì)胞 NCI H929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 159細(xì)胞、J82COT細(xì)胞、CCRF-CEM細(xì)胞 TOV-112D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECGI10細(xì)胞、HEK293-H細(xì)胞、Hs68細(xì)胞 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Artery 47細(xì)胞、Panc 1細(xì)胞 SK-Mel 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 683細(xì)胞、KYSE 140細(xì)胞、Murine Leydig Tumor Cell line-1細(xì)胞 EFM19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC78細(xì)胞、MC3T3細(xì)胞、SKRC-52細(xì)胞 LK-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAEC細(xì)胞、COLO 829細(xì)胞、A1847細(xì)胞 SNU601細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE0030細(xì)胞、WiDr-TC細(xì)胞、KPNRTBM1細(xì)胞 SKG-3a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TALL1細(xì)胞、NIT-1細(xì)胞、Hs 604.T細(xì)胞 SK Mel 24細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Earle's L cells細(xì)胞、SNK-6細(xì)胞、Mono Mac 6細(xì)胞 KMS-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MALME.3M細(xì)胞、TCam 2細(xì)胞、HH [Human lymphoma]細(xì)胞 MV4;11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Transformed Human Liver Epithelial-2細(xì)胞、LICR-HN6細(xì)胞、PA1細(xì)胞 EU-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-11細(xì)胞、Roswell Park Memorial Institute 7951細(xì)胞、NCI-H1404細(xì)胞 SK-N-BE(2)-M17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAntle cell VERona-1細(xì)胞、Mono-Mac-1細(xì)胞、J111細(xì)胞 GM03569B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1819細(xì)胞、HCC1588細(xì)胞、MOLT 3細(xì)胞 SW-1222細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SEG1細(xì)胞、GTL 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