"NCI-H322 epithelioid cells人肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng),應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每?jī)龃婀懿怀^1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 Vero細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H3255細(xì)胞、A-375SM細(xì)胞、32D.3細(xì)胞 b.End3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Calu 6細(xì)胞、C1498細(xì)胞、8305-C細(xì)胞 MiaPaCa2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC151細(xì)胞、CA 46細(xì)胞、KM12SM細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 NCI-H322 epithelioid cells人肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞的衰老:體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證明:成纖維細(xì)胞:來自胎兒傳代50次后衰老死亡,來自成人傳代20次后衰老死亡(與具體年齡有關(guān);來自小鼠傳代14--28次后衰老死亡,來自烏龜傳代90--125次后衰老死亡。細(xì)胞衰老過程中會(huì)發(fā)生一系列的變化,包括:蛋白質(zhì)合成速度降低,已有蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,特異蛋白質(zhì)成份出現(xiàn);同時(shí),細(xì)胞核,線粒體,膜系統(tǒng)、骨架系統(tǒng)等都有結(jié)構(gòu)、功能的改變。細(xì)胞衰老原因,尚無定論,出現(xiàn)過好幾種理論與假說,其中得到較廣泛認(rèn)可的是“自由基損傷假說”。細(xì)胞凋亡:細(xì)胞的死亡是個(gè)體存活的正?,F(xiàn)象,常見的細(xì)胞死亡形式有3種:壞死、凋亡和細(xì)胞毒性。多細(xì)胞生物的生命活動(dòng)中,因?yàn)榄h(huán)境因素的突然變化或病原物的入侵,導(dǎo)致一部分細(xì)胞死去,稱為細(xì)胞的病理死亡,或細(xì)胞壞死。壞死是細(xì)胞暴露于嚴(yán)重的物理或化學(xué)刺激時(shí)導(dǎo)致的細(xì)胞死亡;細(xì)胞毒性是由細(xì)胞或者化學(xué)物質(zhì)引起的單純的細(xì)胞殺傷事件,不依賴于其它兩種細(xì)胞死亡機(jī)理,如殺傷T細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。還有一種情況,一部分細(xì)胞的死亡是生物個(gè)體正常生命活動(dòng)(代謝、生長(zhǎng)、發(fā)育、分化)的一個(gè)必要部分;似乎帶有“犧牲局部,保全整體”的意味。這種情況下的細(xì)胞死亡,明顯地受遺傳控制,稱為細(xì)胞凋亡。凋亡(Apoptosis)則是程序性的、正常的細(xì)胞死亡,是機(jī)體清除無用的或者不想要的細(xì)胞的手段。它與細(xì)胞壞死是兩個(gè)截然不同的過程,無論從形態(tài)學(xué)、生物學(xué)還是生化的特征來說,都有明顯的區(qū)別。細(xì)胞凋亡現(xiàn)象普遍存在于生物界。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖、分化和衰老起著互補(bǔ)與平衡的作用,在多細(xì)胞動(dòng)物的發(fā)育、形態(tài)建成與維持中扮演至關(guān)重要的角色。作為細(xì)胞的一種基本生命現(xiàn)象,凋亡失控的結(jié)果將是可怕的:凋亡不足時(shí),易發(fā)生癌變、病毒性疾病和自身免疫疾病;而凋亡過量則可能產(chǎn)生獲得性免疫缺陷綜合征(HIV)、重癥肝炎與退行性神經(jīng)疾病,如老年性癡呆癥(Alzheimer""s disease)、帕金森氏癥(Parkinson""s disease)。因此研究細(xì)胞凋亡及其機(jī)理具有重要的理論和實(shí)踐意義。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 KTCTL-140細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C518細(xì)胞、COLO 684細(xì)胞、H-1954細(xì)胞 Hs600T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNK1細(xì)胞、Hs832T細(xì)胞、U20-S細(xì)胞 K-1735細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:786.O細(xì)胞、Calu 6細(xì)胞、HSAS3細(xì)胞 HPAF-II/CD18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSC細(xì)胞、GM-346細(xì)胞、SUP-B15細(xì)胞 NCIH1869細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2.35細(xì)胞、NCI-H345細(xì)胞、NCI-H-295細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 NCI-H322 epithelioid cells人肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購(gòu)買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購(gòu)買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購(gòu)買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 HME1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC 116細(xì)胞、LNCaP clone FGC細(xì)胞、NCIH1666細(xì)胞 Centre Antoine Lacassagne-78細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-548細(xì)胞、LNT-229細(xì)胞、NTERA2-cloneD1細(xì)胞 UMRC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL細(xì)胞、NCI-H740細(xì)胞、CMT-93細(xì)胞 SG231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K7M2細(xì)胞、32Dc3細(xì)胞、MRMT-1細(xì)胞 P3-Jiyoye細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-NFS-60細(xì)胞、SHZ-88細(xì)胞、SK-RC-39細(xì)胞 HMEC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-sm 1細(xì)胞、PCI-4B細(xì)胞、MDA-MB-134 VI細(xì)胞 TKB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Anip[973]細(xì)胞、GM05862細(xì)胞、NCI-H1694細(xì)胞 NCTC clone 929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAMB157細(xì)胞、SU-DHL-1細(xì)胞、CCD19Lu細(xì)胞 THC-8307細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS 123細(xì)胞、SW-403細(xì)胞、Medical Research Council cell strain-9細(xì)胞 SCL-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-266-4細(xì)胞、UCLA-SO-M20細(xì)胞、NCI-H647細(xì)胞 NCI-H322 epithelioid cells人肺癌細(xì)胞系 MKN-45細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHSY-5Y細(xì)胞、HPB/ALL細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞 OVCA-420細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIN-m5F細(xì)胞、Fetal Rhesus Kidney-4細(xì)胞、Pa14C細(xì)胞 FET細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTLL-2細(xì)胞、N-Tera-2細(xì)胞、H-1563細(xì)胞 H1355細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-3細(xì)胞、SN-12C細(xì)胞、NCI-H250細(xì)胞 SKG-IIIa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IOSE80細(xì)胞、BC-019細(xì)胞、H-2196細(xì)胞 SNU-739細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-498細(xì)胞、HGBEC細(xì)胞、AM-38細(xì)胞 SNU-739細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-498細(xì)胞、HGBEC細(xì)胞、AM-38細(xì)胞 HNEpC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jurkat-77細(xì)胞、M-NFS-60細(xì)胞、C4-I細(xì)胞 SW954細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS81細(xì)胞、MIA-Pa-Ca-2細(xì)胞、HCC15細(xì)胞 SJSA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L2細(xì)胞、CL34細(xì)胞、SHG44細(xì)胞 Calu 6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAN6細(xì)胞、H220細(xì)胞、K299細(xì)胞 NCIH1703細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK-10A細(xì)胞、Hs 683細(xì)胞、A-172MG細(xì)胞 P36細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGSMC細(xì)胞、NCIH2227細(xì)胞、NHDF細(xì)胞 PTK2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIII細(xì)胞、OVCAR3細(xì)胞、MDA-MB-435 S細(xì)胞 DMS153細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PL-9細(xì)胞、NCI-H1819細(xì)胞、SK-Mel1細(xì)胞 CHO Lec1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caco-2/BBe細(xì)胞、Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細(xì)胞、A375S2細(xì)胞 SKRC 39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JM1細(xì)胞、HOCF細(xì)胞、NCI H69細(xì)胞 CCD-1112sk細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Renal Carcinoma細(xì)胞、Vertebral Cancer of the Prostate細(xì)胞、H727細(xì)胞 N1S1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTera2 cl.D1細(xì)胞、373MG細(xì)胞、RCF細(xì)胞 SK-RC 39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-15細(xì)胞、HT1080細(xì)胞、NCI.H23細(xì)胞 SKNBE-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Laboratory of Allergic Diseases 2細(xì)胞、IMCD3細(xì)胞、SCL I細(xì)胞 UT7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MEG01細(xì)胞、TE-671細(xì)胞、T/GHA-VSMC細(xì)胞 CT26.WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1341細(xì)胞、SCC-25細(xì)胞、SN-12C細(xì)胞 H4-IIE-C3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 27細(xì)胞、Human Embryonic Kidney 293細(xì)胞、Walker-Ca.256細(xì)胞 SUDHL-16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:F-81細(xì)胞、Porcine Kidney-13細(xì)胞、NCIH1781細(xì)胞 CNE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB6Cl30細(xì)胞、SP-2細(xì)胞、MC26細(xì)胞 DAN-G細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:aNK細(xì)胞、MC 3T3-E1細(xì)胞、Ramos-2G6-4C10細(xì)胞 CHO-ori細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FL 62891細(xì)胞、X63-Ag 8.6.5.3細(xì)胞、HCASMC細(xì)胞 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