"SNU-C2A epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 細胞背景資料:詳見相關文獻介紹 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復蘇相關注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 HFL-1細胞系相關產(chǎn)品:CCRF-SB細胞、RCC10RGB細胞、H196細胞 JVM3細胞系相關產(chǎn)品:NCI-SNU-761細胞、MDA-MB-231細胞、SH-SY5Y細胞 MDCKII-WT細胞系相關產(chǎn)品:MMAc-SF細胞、HRGEC細胞、JVM2細胞 細胞生長:貼壁 SNU-C2A epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點應不會影響細胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應立即停用,更換另一批號的血清。 細胞傳代方法:每周兩次換液 293F細胞系相關產(chǎn)品:NCIH1876細胞、T_T_細胞、MV4;11細胞 IM 9細胞系相關產(chǎn)品:3T3 J2細胞、16HBEo-細胞、PANC 203細胞 RBMVEC細胞系相關產(chǎn)品:DoTc2 4510細胞、G401細胞、IPLB-SF-21-AE細胞 Hs 940.T細胞系相關產(chǎn)品:CoC1細胞、TE10細胞、MEF (CF-1)細胞 SVGp12細胞系相關產(chǎn)品:H-2066細胞、SW-1573細胞、TE354T細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 SNU-C2A epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 細胞生長特性:松散附著、多單元的聚合 細胞形態(tài)特性:上皮細胞樣 培養(yǎng)細胞真的不難,最關鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 NCI-H1417細胞系相關產(chǎn)品:KTCTL-140細胞、SNU-620細胞、HuT78細胞 PATU-S細胞系相關產(chǎn)品:SHZ-88細胞、NCI-460細胞、SW620細胞 CFPAC-1細胞系相關產(chǎn)品:TMK1細胞、ACT-1細胞、JeKo-1細胞 GC1-SPG細胞系相關產(chǎn)品:SaOS-2細胞、SUM149-PT細胞、H-1048細胞 CALU1細胞系相關產(chǎn)品:LUDLU1細胞、NCI-HUT-69細胞、H1770細胞 BxPC-3細胞系相關產(chǎn)品:RPMI-7666細胞、M 1細胞、H-345細胞 BC3H1細胞系相關產(chǎn)品:T9細胞、OC 316細胞、NS-20Y細胞 G361細胞系相關產(chǎn)品:EBNA-293細胞、H-1755細胞、Ly10細胞 University of Arizona Cell Culture-812細胞系相關產(chǎn)品:WEHI 231細胞、HCC-1143細胞、NCIH460細胞 Hs 766細胞系相關產(chǎn)品:SUM52PE細胞、A172細胞、HF-91細胞 SNU-C2A epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 HFLS-OA細胞系相關產(chǎn)品:HFF-1細胞、L5178-R細胞、COV 434細胞 NCI-H847細胞系相關產(chǎn)品:Namalwa細胞、NCI-H-128細胞、IPLB-SF 21AE細胞 MESSA細胞系相關產(chǎn)品:M109細胞、KYSE-70細胞、L1210細胞 GM00215細胞系相關產(chǎn)品:OS-RC-2細胞、NCIH524細胞、OCI AML2細胞 OVCAR-8細胞系相關產(chǎn)品:578T細胞、Epstein-Barr-1細胞、BJA-B1細胞 IMCD-3細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2009細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細胞、LIM 1215細胞 IMCD-3細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2009細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細胞、LIM 1215細胞 H1373細胞系相關產(chǎn)品:Opossum Kidney細胞、SUP-T1細胞、JEKO細胞 H2087細胞系相關產(chǎn)品:MIN6細胞、HCC0827細胞、CCD-33Co細胞 Liver-02細胞系相關產(chǎn)品:MC-4細胞、GM00637F細胞、Ca-Ski細胞 Hs578Bst細胞系相關產(chǎn)品:RCC10 RGB細胞、A427細胞、EFM192C細胞 NB4細胞系相關產(chǎn)品:Hep G2細胞、H524細胞、COR-L105細胞 MV4;11細胞系相關產(chǎn)品:Transformed Human Liver Epithelial-2細胞、LICR-HN6細胞、PA1細胞 OCI Ly10細胞系相關產(chǎn)品:SCL-1細胞、HD-LM-2細胞、A2780-CP細胞 KYSE510細胞系相關產(chǎn)品:Eph4 1424細胞、AE1201細胞、Ramos 2G6.4C10細胞 LS-123細胞系相關產(chǎn)品:Hs 739.T細胞、HEK293-F細胞、H2330細胞 RMa-bm細胞系相關產(chǎn)品:CT26WT細胞、HEL-92.1.7細胞、HCC2218細胞 Murine Long bone Osteocyte-Y4細胞系相關產(chǎn)品:SCC VII細胞、OCI/AML5細胞、MONO-MAC 6細胞 NIH:OVCAR-5細胞系相關產(chǎn)品:Ca9-22細胞、HCT-GEO細胞、Hs870T細胞 NIH:OVCAR-10細胞系相關產(chǎn)品:RPTEC TERT1細胞、HONE-1細胞、MDA MB 175 VII細胞 OCI-Ly 3細胞系相關產(chǎn)品:32Dc3細胞、LA 4細胞、SR-786細胞 MDA-MB-468細胞系相關產(chǎn)品:V79-4細胞、H82細胞、Ra No. 1細胞 SK_HEP1細胞系相關產(chǎn)品:WIL2 S細胞、Panc 03.27細胞、Hk-2細胞 CCD-33Co細胞系相關產(chǎn)品:HMC細胞、SKNEP-1細胞、SBC3細胞 Hs706T細胞系相關產(chǎn)品:SR786細胞、JC細胞、Panc02細胞 SKLU1細胞系相關產(chǎn)品:BTI-Tn-5B1-4細胞、H2085細胞、CNE2細胞 J-82細胞系相關產(chǎn)品:293EBNA細胞、MDA-175細胞、NCI-H2172細胞 MCF12F細胞系相關產(chǎn)品:hs 68細胞、MGc80-3細胞、TM4細胞 H1355細胞系相關產(chǎn)品:NBL-3細胞、SN-12C細胞、NCI-H250細胞 A101D細胞系相關產(chǎn)品:SNU-C2B細胞、NCI-A549細胞、B6Tert-1細胞 SNU-719細胞系相關產(chǎn)品:HcerEpic細胞、P36細胞、Sp2/0-Ag14細胞 Colo16細胞系相關產(chǎn)品:HBMEC細胞、NCIH520細胞、Wills Eye Research Institute-Retinoblastoma-1細胞 Nittby-Salford 1細胞系相關產(chǎn)品:FAK+/+細胞、H-1522細胞、Dx5細胞 TALL-1 [Human adult T-ALL]細胞系相關產(chǎn)品:NCI-1155細胞、H-2052細胞、Panc05.04細胞 HLE B-3細胞系相關產(chǎn)品:M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細胞、Ly1細胞、CZ-1細胞 WERI-Rb 1細胞系相關產(chǎn)品:C4-2細胞、RK13細胞、Y3-Ag1,2,3細胞 C-4-I細胞系相關產(chǎn)品:Capan2細胞、beta-TC6細胞、Jijoye細胞 Pt K2 (NBL-5)細胞系相關產(chǎn)品:NP69SV40T細胞、Cor L88細胞、NCIH1650細胞 Pt K2 (NBL-5)細胞系相關產(chǎn)品:NP69SV40T細胞、Cor L88細胞、NCIH1650細胞 Mhh-Call 2細胞系相關產(chǎn)品:GP2-293細胞、RBVEC細胞、J 774A.1細胞 HCoEpiC細胞系相關產(chǎn)品:P36細胞、C8D1A細胞、HONE-1細胞 MD Anderson-Metastatic Breast-134-VI細胞系相關產(chǎn)品:HIBEpiC細胞、HRA19細胞、P3 NS1 Ag4/1細胞 A2780細胞系相關產(chǎn)品:RMG1細胞、Sf21細胞、CCD 841 CoTr細胞 OCI-Ly19細胞系相關產(chǎn)品:T84細胞、K-1735細胞、TNC-1B12B4細胞 COLO-824細胞系相關產(chǎn)品:Med 341細胞、Rat Skin 1細胞、M1細胞 GM2219C細胞系相關產(chǎn)品:AK細胞、HEK 293-EBNA細胞、Loucy細胞 H-1563細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2023細胞、MIN6細胞、NCIH1568細胞 Tn-5細胞系相關產(chǎn)品:MHCC97H細胞、AG06814-M細胞、16-HBE細胞 C-28I2細胞系相關產(chǎn)品:RPPVEC細胞、H-1650細胞、NCI-H1993細胞 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