"SW1463 epithelioid cells人結(jié)腸腺癌細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題。總結(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 SNU-387細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1395細胞、NCIH1105細胞、UMNSAH/DF#1細胞 P3X63-Ag8.653細胞系相關(guān)產(chǎn)品:8226/S細胞、PC14細胞、OV3121細胞 KYSE0520細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caki-1細胞、RM-1細胞、S16細胞 細胞生長:貼壁 SW1463 epithelioid cells人結(jié)腸腺癌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細胞和你一樣,消化下來也是一團的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細胞生長挺快,那么細胞的增殖能力應(yīng)該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能:一、細胞消化后吹打不均勻,造成細胞成團生長:二、細胞細化太過,細胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細胞聚團生長。解決辦法:根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化,將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉毎劳?。我談?wù)剛€人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細胞傳代方法:1:3—1:8傳代,每周換液1-2次 NCI-H1650細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P30/0HK細胞、Normal fibroblast-10細胞、SKRC-42細胞 Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS940細胞、S.B.細胞、Ca761細胞 HPMEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hela-mock細胞、GEO細胞、FAK+/+細胞 LTEPsm細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H596細胞、ONS76細胞、LC-1/sq細胞 LCD細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-520細胞、ISHI細胞、GM12878細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 SW1463 epithelioid cells人結(jié)腸腺癌細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:上皮細胞 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 A2058細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-480細胞、AMC-HN8細胞、A7r5細胞 SUM 52細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA415細胞、SU86-86細胞、SKRC-20細胞 Calu-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-140細胞、BCAP37細胞、NCI-BL2141細胞 TE354T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2008細胞、RPMI6666細胞、PANC 813細胞 HO8910細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-1B細胞、HBZY 1細胞、H-2330細胞 SUM102PT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-920細胞、TE 354.T細胞、Chang liver細胞 BrCL18細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MUTZ3細胞、SKMEL-2細胞、VK-2/E6E7細胞 MDAMB134VI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:R2C細胞、HCC0015細胞、RPMI 1846細胞 TF-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Chang liver細胞、Alexander cells細胞、hTERT RPE1細胞 BHT-101細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSTO211H細胞、DV-90細胞、JeKo 1細胞 SW1463 epithelioid cells人結(jié)腸腺癌細胞系 HuP-T3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-CO-1細胞、SMMC-7721細胞、HCT-116細胞 C2C12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OC 316細胞、COLO-HSR細胞、RPE D407細胞 BJA-B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3Ag1.2.3細胞、NE-1細胞、BC-020細胞 SNU-216細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHCC97-L細胞、JVM-3細胞、M-NFS-60細胞 H2066細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H889細胞、T-84細胞、PLA802細胞 OC-3-VGH細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL-6細胞、PJ34細胞、SUD-4細胞 OC-3-VGH細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL-6細胞、PJ34細胞、SUD-4細胞 OVCA433細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EC-9706細胞、JCA-1細胞、NCI-H2029細胞 Fox/NY細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ZR751細胞、HCS-2/8細胞、SNB-19細胞 BRL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293細胞、LAD 2細胞、Hs 445細胞 NCI-H1648細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT26-clone 25細胞、UPCI:SCC154細胞、MSTO-211H細胞 WTRL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AAV-293細胞、H-920細胞、DanG細胞 RPMI 7951細胞系相關(guān)產(chǎn)品:X63.Ag8.653細胞、BEAS 2B細胞、SU-DHL-4細胞 CCRF-CEM C1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIMEC細胞、FaDu細胞、HCT-GEO細胞 IR983F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK-92細胞、32D clone 3細胞、EL-4細胞 HEK293T/17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNSH細胞、University of Arizona Cell Culture-893細胞、SUM149PT細胞 hRMECs細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSAS4細胞、LSECs細胞、NCI-H1672細胞 GM00637B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Neukoplast細胞、L-M(TK-)細胞、alphaTC1 Clone 6細胞 HEK 293細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM266細胞、PaTu8988s細胞、LN382細胞 Panc_08_13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-112CoN細胞、Jurkat 77細胞、PCI-4M細胞 Ku812F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:159PT細胞、GC-2細胞、CD-18細胞 T-HSC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-119細胞、Leghorn Male Hepatoma cell line細胞、ROS17/2.8細胞 NCIH727細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-N87細胞、TN5B14細胞、SW1573細胞 108CC15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OAW 42細胞、BHP10-3細胞、RT 112細胞 SU-DH-L5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC 61細胞、RetroPack PT67細胞、EBTr細胞 ReNcell CX細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HM06.A1細胞、U251MG細胞、P3-x63-Ag8 653細胞 NCIH1869細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2.35細胞、NCI-H345細胞、NCI-H-295細胞 A-72細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-157細胞、aTC1 Clone 6細胞、NU-GC-4細胞 Cates-1B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BHK 21細胞、AAV-293細胞、DC 2.4細胞 LTEP-s細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IEC6細胞、CCRF-CEM/S細胞、TR 146細胞 OCILY7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-520細胞、PT-67細胞、Hs839T細胞 MD Anderson-Metastatic Breast-330細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RINm-5F細胞、3T3-Swiss albino細胞、EBC1細胞 NT2D1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GAK細胞、NL20SV細胞、D10細胞 Hos TE-85細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MS1細胞、H650細胞、ACC3細胞 BIU-87細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUT 28細胞、COLO320DM細胞、MDA-MB-468-RED細胞 H28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1618細胞、HOK細胞、V79-GalK1細胞 SHIN3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO8910PM細胞、H187細胞、PC 61細胞 RMC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VM-CUB-I細胞、LC-1-sq細胞、HuT102細胞 HPAF II細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-134-VI細胞、Caki-1細胞、NUGC2細胞 Hs706T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SR786細胞、JC細胞、Panc02細胞 NCI-H498細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPE1-hTERT細胞、B16 subline B78細胞、22Rv-1細胞 M109細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JAR細胞、RGC5細胞、Hs895.T細胞 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